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我司技术深度解析客户提问!

来源:未知     时间:2020-10-13 08:57     浏览次数:

ELISA新手难免会遇到一些问题,前段时间我公司技术就收到两位顾客的技术问题,今天的技术文章中,就把这两位客户的问题分享给大家,elisa试剂盒希望能帮助到遇到相同问题的同学!
 
例1,客户提问:竞争法ELISA测定抗原时,固定抗体,酶标抗原和受检抗原竞争与固相抗体结合,请问能不能用酶标二抗(抗固定抗体的抗体)和受检抗原竞争呢?为什么?难道因为亲和力不一样?但是不都是抗原抗体反应吗?亲和力不应该是一样的吗?

技术解析:当然不能了,二抗结合抗体的位点,和抗原抗体结合的位点,不相同!二抗与抗体结合的是抗体的Fc段,抗原抗体结合的是抗体的CDR区。就相当于一个人抓手,一个人抓脚,结合的位点不一样,构不成竞争关系。
 
例2,客户提问: zui近才开始做Elisa,间接法检测抗体。我大致的步骤是包被(4度过夜),PBST洗涤,封闭(5%脱脂奶粉),洗涤,加入一抗,洗涤,加入二抗,洗涤,设置的阴性对照就是步直接在孔中加100ul 包被液,没有加蛋白,照理说没有蛋白zui后就不应该显色,怀疑是二抗没洗涤干净所以才显色,洗涤了至少5次以上,zui后还在纸上使劲拍干,但是还是显色,求高人指点~~(包被液是碳酸盐缓冲液,稀释液assay buffer: PBS:KH2PO4,Na2HPO4.12H2O,NaCL,KCL,Tween-20,我的一抗二抗都是用这个稀释液配的,封闭液也是用稀释液配的脱脂奶粉,没有血清啊)

技术解析:
可能封闭效果不好;
可能封闭液脱脂奶粉可以和一抗交叉反应;
一抗没有洗涤干净;
④ elisa试剂盒加样时操作出现错误。先确定封闭有没有问题,洗的话二抗确实多洗几遍没错,没有洗板机,每次洗可以摇晃板子,每遍1-2分钟,也可以多设置几个阴性孔,观察结果,看是不是没洗干净的问题。加样尽量加到底部,避免沾壁。
 
我司拥有一对一全程指导服务,的ELISA检测试剂盒,让您赢在起步。