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mda-pca-2b细胞

来源:未知     时间:2017-07-21 13:46     浏览次数:
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前列腺癌细胞
(MDA-PCa-2b)
细胞用途:仅供科研使用。
细胞培养步骤
1)培养基及培养冻存条件准备:
1.准备 F-12K 培养基(F-12K: GIBCO,货号:21127-022),添加 25 ng/mL 霍乱 毒素,10 ng/mL小鼠表皮生长因子,0.005 mM磷酸乙醇胺,100 pg/mL氢化可 的松,45 nM亚硒酸,0.005 mg/mL牛胰岛素;优质胎牛血清,20%。
2.培养条件:气相:空气,95%;二氧化碳,5%。温度:37摄氏度,培养箱 湿度为70%-80%。
3.冻存液:90%完全培养基,10%DMSO,现用现配。液氮储存。

2)细胞处理:
复苏细胞:将含有lmL细胞悬液的冻存管在37°C水浴中迅速摇晃解冻,加 入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补 加l-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜(或将 细胞悬液加入l〇cm皿中,加入约8ml培养基,培养过夜)。第二天换液并检 查细胞密度。
细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。

对于贴壁细胞,传代可参考以下方法:
弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
力口 2m丨消化液(0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养瓶中,置于37°C培
养箱中消化1-2分钟,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部 分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止 消化。
按6-8ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加l-2mL培养液后吹匀。
将细胞悬液按1: 2到1: 5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者 瓶中。
细胞冻存:待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时,弃 去培养基后加入少量胰酶,细胞变圆脱落后,加入约lml含血清的培养基后 加入冻存管中,再添加1〇%DMSO后进行冻存。

注意事项:
收到细胞后,若发现干冰己挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染,请立 即与我们联系。
所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性,必须在二级生物安全台内操作,并请注 意防护,所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。

细胞特性
1)来源:前列腺癌
2)形态:上皮细胞样
3)含量:>lxl06 个/mL
4)污染:支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格:T25瓶或者lmL冻存管包装
运输和保存:使用含有优质胎牛血清的2ml冻存管发送存活细胞。收到细胞后, 可在1000RPM,常温条件下,离心5min后,于洁净操作台弃去上清,加入推荐 使用的培养基后转移至l〇cm培养皿或者T25培养瓶中培养,传代达到细胞生长 状态良好时,再进行冻存。具体操作见细胞培养步骤。