当前位置: 首页 > 公司新闻 > 纪宁生物亚硝酸还原酶(NiR)测试盒测定意义

手机扫码访问本站


微信咨询

纪宁生物亚硝酸还原酶(NiR)测试盒测定意义

纪宁生物亚硝酸还原酶(NiR)测试盒测定意义介绍如下:
亚硝酸还原酶(NiR)测试盒

注 意:正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。
测定意义:
硝酸还原酶(NiR)是一类能催化亚硝酸盐还原的酶,广泛存在于微生物及植物体内,是自然界氮循环过程中的关键酶,可以将亚硝酸盐降解为 NO 或 NH3,从而减少环境中亚硝态氮的积累,降低因亚硝酸盐累积而造成的对生物体的毒害作用。
测定原理:
亚硝酸还原酶可将 NO2—还原为 NO,使样品中参与重氮化反应生成紫红色化合物的 NO2—减少,即 540nm处吸光值的变化可反映亚硝酸还原酶的活性。
需自备的仪器和用品:天平、研钵、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板、水浴锅、低温离心机。
试剂的组成和配制:
提取液:液体 112mL×1 瓶,4℃保存。
试剂一:液体 4mL×1 瓶,4℃保存。
试剂二:粉剂×1 瓶,4℃保存。临用前加 5mL 蒸馏水溶解。
试剂三:液体 5mL×1 瓶,4℃保存。(如出现沉淀可以 70-80℃加热溶解)
试剂四:液体 10mL×1 瓶,4℃避光保存。(如出现沉淀可以 70-80℃加热溶解)
试剂五:液体 10mL×1 瓶,4℃避光保存。
工作液:临用前根据用量将试剂四和试剂五以 1:1 的比例混合。
酶液提取:
1. 组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1mL提取液),进行冰浴匀浆。10000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。
2.细菌、真菌:按照细胞数量(10⁴个):提取液体积(mL)为 500~1000:1 的比例(建议 500 万细胞加入1mL提取液),冰浴超声波破碎细胞(功率300w,超声3秒,间隔 7 秒,总时间 3min);然后 10000g,4℃离心 10min,取上清置于冰上待测。
测定操作表:
空白管 对照管 测定管
样本(μL) 20 20
蒸馏水(μL) 20 40
试剂一(μL) 40 40
试剂二(μL) 40 40 40
混匀后,25℃反应 1h
试剂三(μL) 40 40 40
充分震荡 30S
上清液(μL)70 70 70
工作液(μL)140 140 140
充分混匀,,静置 3min 后测定各管 540nm 处吸光值,分别记为 A 空白管、A 对照管、A 测定管。空白管只要做一管,每个测定管需设一个对照管。
计算公式:
a. 使用微量石英比色皿测定的计算公式如下
标准曲线:y = 1.3594x + 0.0072,R2 = 0.9997;x为标准品浓度(μmol/mL),y 为吸光值(A 标准管-A 空白管)。
1.按照蛋白含量计算
酶活单位定义:每毫克组织蛋白每小时还原 1μmol NO2ˉ的量为一个酶活力单位。
NiR(μmol/h /mg prot)= [A 空白管-(A测定管-A 对照管)-0.0072]÷1.3594×V 标÷(V 样×Cpr)÷T = 1.47×(A 空白管-A 测定管+A 对照管-0.0072)÷Cpr
2. 按照样本质量计算
酶活单位定义:每克组织每小时还原 1μmol NO2ˉ的量为一个酶活力单位。
NiR(μmol/h/g 鲜重)=[A 空白管-(A 测定管-A 对照管)-0.0072]÷1.3594×V 标÷(W ×V 样÷V 样总)÷T =1.47×(A 空白管-A 测定管+A 对照管-0.0072)÷W
3. 按照细胞数量计算
酶活单位定义:每 10⁴个细胞每小时还原 1μmol NO2ˉ的量为一个酶活力单位。NiR(μmol/h /10⁴cell)= [A 空白管-(A 测定管-A 对照管)-0.0072]÷1.3594×V 标÷(细胞数量×V 样÷V 样总)÷T = 1.47×(A 空白管-A 测定管+A 对照管-0.0072)÷细胞数量V 标:标准液体积,0.04mL;V 样:体系中加入样本体积,0.02mL;V 样总:加入提取液体积,1mL;T:
反应时间,1h; Cpr:样本蛋白含量;W:样本质量,g
b. 使用 96 孔板测定的计算公式如下
标准曲线:y = 0.6797x + 0.0072,R2 = 0.9997;x 为标准品浓度(μmol/mL),y 为吸光值(A 标准管-A 空白
管)。
1.按照蛋白含量计算
酶活单位定义:每毫克组织蛋白每小时还原 1μmol NO2ˉ的量为一个酶活力单位。NiR(μmol/h /mg prot)= [A 空白管-(A 测定管-A 对照管)-0.0072]÷0.6797×V 标÷(V 样×Cpr)÷T = 2.94×(A 空白管-A 测定管+A对照管-0.0072)÷Cpr
2. 按照样本质量计算
酶活单位定义:每克组织每小时还原1μmol NO2ˉ的量为一个酶活力单位。NiR(μmol/h/g 鲜重)=[A 空白管-(A测定管-A 对照管)-0.0072]÷0.6797×V 标÷(W ×V 样÷V 样总)÷T =
2.94×(A 空白管-A 测定管+A 对照管-0.0072)÷W
3. 按照细胞数量计算
酶活单位定义:每 10⁴个细胞每小时还原 1μmol NO2ˉ的量为一个酶活力单位。NiR(μmol/h /10⁴cell)= [A 空白管-(A 测定管-A 对照管)-0.0072]÷0.6797×V 标÷(细胞数量×V 样÷V 样总)÷T = 2.94×(A 空白管-A 测定管+A 对照管-0.0072)÷ 细胞数量V 标:标准液体积,0.04mL;V 样:体系中加入样本体积,0.02mL;V 样总:加入提取液体积,1mL;T:
反应时间,1h; Cpr:样本蛋白含量;W:样本质量,g
注意事项:
1. 配制好的工作液 3 天内使用完。
2. 若吸光值超过 1.5,将上清液进行适当的稀释后再加入工作液显色,并在计算公式中乘以稀释倍数。
3. 严格控制显色时间,否则会对结果有影响。
4. 标准曲线线性范围为 0.03μmol/mL-1.5μmol/mL。
5. A 空白管-(A 测定管-A 对照管)线性范围为 0.02-1.5。
上海纪宁生物科技有限公司自成立以来,一向以“优异亚硝酸还原酶(NiR)测试盒的产品,优惠的报价和交心的服务”得到广阔新老客户的必定和支撑,不断提高自身的专业技术水平和服务质量,为您提供非常好的产品。
欢迎光临纪宁实业!登录 注册

联系我们

  • QQ:3005143625
  • 手机号码:13524666836
  • 服务电话:021-66980655
  • E-mail:3005143625@qq.com
  • 公司地址:上海市金山工业区亭卫公路6558号9幢2447-12室
分享到  

友情链接:
elisa试剂盒 elisa检测试剂盒 elisakit 植物elisa试剂盒 CAS号数据库
Copyright © 2006-2023 上海纪宁实业有限公司. All rights reserved. 版权所有 沪ICP备13030217号-3 网站地图