纪宁生物亚硝酸还原酶(NiR)测试盒测定意义介绍如下：
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注 意：正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。
测定意义：
硝酸还原酶（NiR）是一类能催化亚硝酸盐还原的酶，广泛存在于微生物及植物体内，是自然界氮循环过程中的关键酶，可以将亚硝酸盐降解为 NO 或 NH3，从而减少环境中亚硝态氮的积累，降低因亚硝酸盐累积而造成的对生物体的毒害作用。
测定原理：
亚硝酸还原酶可将 NO2—还原为 NO，使样品中参与重氮化反应生成紫红色化合物的 NO2—减少，即 540nm处吸光值的变化可反映亚硝酸还原酶的活性。
需自备的仪器和用品：天平、研钵、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板、水浴锅、低温离心机。
试剂的组成和配制：
提取液：液体 112mL×1 瓶，4℃保存。
试剂一：液体 4mL×1 瓶，4℃保存。
试剂二：粉剂×1 瓶，4℃保存。临用前加 5mL 蒸馏水溶解。
试剂三：液体 5mL×1 瓶，4℃保存。（如出现沉淀可以 70-80℃加热溶解）
试剂四：液体 10mL×1 瓶，4℃避光保存。（如出现沉淀可以 70-80℃加热溶解）
试剂五：液体 10mL×1 瓶，4℃避光保存。
工作液：临用前根据用量将试剂四和试剂五以 1:1 的比例混合。
酶液提取：
1. 组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL提取液），进行冰浴匀浆。10000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
2．细菌、真菌：按照细胞数量（10⁴个）：提取液体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细胞加入1mL提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔 7 秒，总时间 3min）；然后 10000g，4℃离心 10min，取上清置于冰上待测。
测定操作表：
空白管 对照管 测定管
样本（μL） 20 20
蒸馏水（μL） 20 40
试剂一（μL） 40 40
试剂二（μL） 40 40 40
混匀后，25℃反应 1h
试剂三（μL） 40 40 40
充分震荡 30S
上清液（μL）70 70 70
工作液（μL）140 140 140
充分混匀，，静置 3min 后测定各管 540nm 处吸光值，分别记为 A 空白管、A 对照管、A 测定管。空白管只要做一管，每个测定管需设一个对照管。
计算公式：
a. 使用微量石英比色皿测定的计算公式如下
标准曲线：y = 1.3594x + 0.0072，R2 = 0.9997；x为标准品浓度（μmol/mL），y 为吸光值（A 标准管-A 空白管）。
1．按照蛋白含量计算
酶活单位定义：每毫克组织蛋白每小时还原 1μmol NO2ˉ的量为一个酶活力单位。
NiR（μmol/h /mg prot）= [A 空白管-(A测定管-A 对照管)-0.0072]÷1.3594×V 标÷（V 样×Cpr）÷T = 1.47×（A 空白管-A 测定管+A 对照管-0.0072）÷Cpr
2. 按照样本质量计算
酶活单位定义：每克组织每小时还原 1μmol NO2ˉ的量为一个酶活力单位。
NiR（μmol/h/g 鲜重）=[A 空白管-(A 测定管-A 对照管)-0.0072]÷1.3594×V 标÷（W ×V 样÷V 样总）÷T =1.47×（A 空白管-A 测定管+A 对照管-0.0072）÷W
3. 按照细胞数量计算
酶活单位定义：每 10⁴个细胞每小时还原 1μmol NO2ˉ的量为一个酶活力单位。NiR（μmol/h /10⁴cell）= [A 空白管-(A 测定管-A 对照管)-0.0072]÷1.3594×V 标÷（细胞数量×V 样÷V 样总）÷T = 1.47×（A 空白管-A 测定管+A 对照管-0.0072）÷细胞数量V 标：标准液体积，0.04mL；V 样：体系中加入样本体积，0.02mL；V 样总：加入提取液体积，1mL；T：
反应时间，1h； Cpr：样本蛋白含量；W：样本质量，g
b. 使用 96 孔板测定的计算公式如下
标准曲线：y = 0.6797x + 0.0072，R2 = 0.9997；x 为标准品浓度（μmol/mL），y 为吸光值（A 标准管-A 空白
管）。
1．按照蛋白含量计算
酶活单位定义：每毫克组织蛋白每小时还原 1μmol NO2ˉ的量为一个酶活力单位。NiR（μmol/h /mg prot）= [A 空白管-(A 测定管-A 对照管)-0.0072]÷0.6797×V 标÷（V 样×Cpr）÷T = 2.94×（A 空白管-A 测定管+A对照管-0.0072）÷Cpr
2. 按照样本质量计算
酶活单位定义：每克组织每小时还原1μmol NO2ˉ的量为一个酶活力单位。NiR（μmol/h/g 鲜重）=[A 空白管-(A测定管-A 对照管)-0.0072]÷0.6797×V 标÷（W ×V 样÷V 样总）÷T =
2.94×（A 空白管-A 测定管+A 对照管-0.0072）÷W
3. 按照细胞数量计算
酶活单位定义：每 10⁴个细胞每小时还原 1μmol NO2ˉ的量为一个酶活力单位。NiR（μmol/h /10⁴cell）= [A 空白管-(A 测定管-A 对照管)-0.0072]÷0.6797×V 标÷（细胞数量×V 样÷V 样总）÷T = 2.94×（A 空白管-A 测定管+A 对照管-0.0072）÷ 细胞数量V 标：标准液体积，0.04mL；V 样：体系中加入样本体积，0.02mL；V 样总：加入提取液体积，1mL；T：
反应时间，1h； Cpr：样本蛋白含量；W：样本质量，g
注意事项：
1. 配制好的工作液 3 天内使用完。
2. 若吸光值超过 1.5，将上清液进行适当的稀释后再加入工作液显色，并在计算公式中乘以稀释倍数。
3. 严格控制显色时间，否则会对结果有影响。
4. 标准曲线线性范围为 0.03μmol/mL-1.5μmol/mL。
5. A 空白管-（A 测定管-A 对照管）线性范围为 0.02-1.5。
上海纪宁生物科技有限公司自成立以来，一向以“优异亚硝酸还原酶(NiR)测试盒的产品，优惠的报价和交心的服务”得到广阔新老客户的必定和支撑，不断提高自身的专业技术水平和服务质量，为您提供非常好的产品。
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