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紫草药材中的萘醌类是主要的有效成分，含量约占3%～6. 5%。文献报道在新疆紫草中得到的萘醌类化合物，包括去氧紫草素、紫草素、β-羟基戊酰紫草素、β-二甲基丙烯酰紫草素、β-羟基异戊酰阿卡宁、乙酰紫草，其中，乙酰紫草醌、紫草醌、去氧紫草素等萘醌类色素为紫草药材的主要有效成分。
1 仪器与试剂
1. 1 仪器
Waterse2695 高效液相色谱仪，Waters2998 二极管阵列检测器； KQ-250DB 型数控超声波清洗器(昆山市超声波仪器有限公司)；电子天平FR224CN(上海奥豪斯仪器有限公司制造)；电热恒温水浴锅HH. SY11-NY2C(北京市长风仪器仪表公司)；SHBIII 循环水式真空泵(巩义市予华仪器有限责任公司) 。
1. 2 材料与试剂
去氧紫草素对照品(上海源叶生物科技有限公司 B21034-10MG)； 山东紫草、 安徽紫草和新疆紫草(药店购买，经段瑞老师鉴定)；乙腈色谱纯(天津永大试剂有限公司)；甲醇色谱纯(天津永大试剂有限公司) 。
2 试验方法与结果
2. 1 溶液配制
2. 1. 1 对照品溶液的制备
精密称取去氧紫草素的对照品1 mg，置 10 ml 的容量瓶中，用甲醇溶解，
稀释至刻度，摇匀，即得质量浓度为 0. 1 mg/ml 的对照品溶液，置阴凉干燥处，避光环境保存。
2. 1. 2 供试品溶液的制备
将干燥紫草药材粉碎，过 60 目筛， 精密称取紫草药材粉末1. 0 g，置于 50
ml 的锥形瓶中，加入甲醇 25 ml，超声提取30 min，振摇后静置冷却约10 min，滤过，滤渣加20 ml 的甲醇，超声提取20 min，合并甲醇滤液并定容至50 ml，置40 ℃恒温水浴蒸干，残渣用甲醇溶解并定容至25 ml，用0. 45μm的微孔滤膜过滤， 既得供试品溶液。
2. 2 方法学考察和样品测定
2. 2. 1 色谱条件和系统适应性试验
色谱柱: Symmetry C18 BDS 柱(250 mm×4. 6 mm，5μm)； 流动相:乙腈∶水( 80∶20)；流速: 1. 0 ml/min； 检测波长: 265 nm；柱温: 35 ℃；进样量: 20 μl； 检测时间: 30min。在此色谱条件下，去氧紫草素的理论塔板数大于5000，与相邻色谱峰分离度大于 1. 7，对称因子为1. 06。
2. 2. 2 专属性试验
取空白溶液、对照品溶液、三个产地的供试品溶液适量，按“2. 2. 1”项下色谱条件进样，记录色谱图(图1)。由图 1 可见，空白溶液色谱在对照品色谱相应的位置无吸收峰，表明在该试验条件下其他组分对测定结果无干扰，专属性较好。
2. 2.3 线性关系的考察
精密量取去氧紫草素对照品溶液(0. 1 mg /ml) 各1. 0 ml、2. 0 ml、3. 0 ml、 4. 0ml、5. 0 ml，分别置于 10 ml 容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，配成10. 0μg /ml、20. 0μg /ml、30. 0 μg/ml、40. 0μg /ml、50. 0 μg /ml 的溶液，分别取各溶液20μl 进样，在上述色谱条件下进行分析。以对照品浓度(μg /ml) 为横坐标(X)，峰面积为纵坐标(Y)，绘制标准曲线并进行回归计算可得线性回归方程为: Y = 34769X－62579，r = 0. 9994， 表明去氧紫草素在 10. 00～50. 00μɡ/ml范围内线性关系良好。
2. 2. 4 精密度试验
取线性关系项下取配好的去氧紫草素对照品溶液，连续进样 6 次，记录在 265 nm处去氧紫草素的色谱图，以峰面积计算，RSD 值为0. 31% ，表明仪器的精密度良好。
2. 2. 5 稳定性试验
称取三个产地的紫草粉末，按“2. 1. 2” 项下的方法制备供试品溶液， 按“2. 2. 1”项下的色谱条件进样，分别在 0 h，2 h，4 h，6 h，8 h，10h 不同时间段内重复进样三次，每次进样 20μl，记录去氧紫草素的峰面积，计算其含量，RSD 分别为安徽 0. 10% ，新疆 0. 07%，山东 0. 06% ，表明三个产地去氧紫草素在 10 h 内较稳定。
2. 2. 6 重复性试验
分别取山东、新疆、安徽产地的紫草粉末，按“2. 1. 2” 项下的方法分别制备供试品溶液并处理成6份，依次进样每次20μl，平行测定 6次，计算去氧紫草素的百分含量分别为山东71. 40% ，新疆 67. 83%，安徽134. 37%，RSD 值分别为0. 04%，0. 10%，0. 58% 。表明方法重复性较好。
2. 2. 7 回收率试验
准确量取已知含量的安徽供试品溶液共 9 份，每份 1 ml，分别精密加入去氧紫草素对照品适量( 约相当于安徽紫草中去氧紫草素含量的 80%，100%，120% )，置于 5 ml 的容量瓶。实验分为三组，每组分为 3 份。按“2. 2. 1” 项下色谱条件进样 20μl，测定峰面积，计算去氧紫草素的含量。测得低、中、高三个不同浓度的平均加样回收率分别为 100. 17%， 112. 82%， 125. 28%， 9 个加样回收率数据的RSD 值 0. 10%，在误差允许的范围内。
2. 2. 8 样品的含量测定
分别称取山东、新疆和安徽紫草粉末，按“2. 1. 2”项下方法制备供试品溶液，各处理成3 份，按“2. 2. 1”项下色谱条件进样测定，山东、新疆、安徽紫草中去氧紫草素的百分含量分别为 71. 42% 、67. 77% 、135. 32%，RSD 分别为0. 02%、0. 04%、0. 04% 。其结果见表 1，实验结果表明，不同产地的紫草中去氧紫草素的含量存在差别。
[1]朱永乐,董娜,曲晓兰,齐永秀.HPLC法测定不同产地紫草中去氧紫草素的含量[J].泰山医学院学报,2017,38(11):1229-1231.