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19356-17-3/骨化二醇的含量测定和分离纯化

背景及概述[1-2]

骨化二醇(calcifediol)是人体内维生素D3(VD3)在肝脏的VD3羟化酶的作用下转化而来,对空气、热、光敏感,易溶于乙醇等极性有机溶剂,不溶于水。由美国Upjohn公司上世纪八十年代开发上市,用于治疗老年人骨质疏松症等各种慢性骨紊乱,以及与慢性肾衰竭有关的代谢性骨病。

维生素D2和D3被吸收后首先经肝脏维生素D-25羟化酶系统羟基化为25-羟代谢物,即骨化二醇,然后骨化二醇在肾脏经维生素D-Ⅰ羟化酶系统催化,形成1,25-双羟维生素D3(骨化三醇),才具有生物活性作用。骨化二醇血药浓度达峰时间约为4小时,作用持续时间为15~20日,肾功能衰竭时作用时间延长2~3倍。半衰期为10~22日。

骨化二醇的含量测定和分离纯化

用法用量[1]

口服:初量,每周0.3~0.35mg,分为每日或隔日1次,需要时4周后增加用量。一般每日服0.05~0.1mg或隔日服0.1~0.2mg就有疗效。血钙浓度正常病人隔日服0.02mg,即有效。2岁以上小儿口服:每日0.02~0.05mg;2~10岁,每日0.05mg。10岁以上用量可参照成人用量。

含量测定[2]

谢洪兵等人报道了快速准确地测定维生素D3微生物转化液中骨化二醇含量的方法。采用依利特HypersilC18色谱柱(4.6mm×250mm,5μm),流动相为乙腈-水(85∶15),流速2.0mL·min-1,柱温50℃,检测波长265nm,外标法定量。结果:骨化二醇在10.1~2020μg·mL-1内呈良好线性关系,r=0.9999,定量限0.6ng,检出限0.3ng,平均加样回收率为101.06%(RSD1.44%,n=9)。结论:该方法简便,准确,灵敏度高,分离度好,可用于VD3微生物转化生产中定量骨化二醇的要求。

分离纯化[3]

(1)、在微生物酶催化维生素D3生成骨化二醇(25-羟基维生素D3)转化液中,按照体积比1:1加入乙酸乙酯,震荡萃取1h,收集上层有机溶剂,得到骨化二醇提取液a。

(2)、将上述骨化二醇提取液a,经过减压浓缩,回收乙酸乙酯,用甲醇重新溶解浓缩物,调整骨化二醇浓度在0.5mg/L,得到上柱溶液b。

(3)、琼脂糖凝胶过滤层析经活化后,采用湿法装柱,将上柱溶液b以2BV/h的流速通过琼脂糖凝胶过滤层析柱,选用层析分子量为400Da,以1BV的乙酸乙酯做为洗脱液,以2BV/h的流速对其进行洗脱,收集洗脱液,在60℃,压力-0.08MPa条件下,减压浓缩,干燥,得到纯度32.1%的骨化二醇产品。

参考文献

[1]实用药物手册

[2]谢洪兵,曾志刚,翟龙飞.反相高效液相色谱法测定维生素D_3微生物转化液中骨化二醇含量[J].中国药学杂志,2015,50(01):72-74.

[3] [中国发明,中国发明授权] CN201910121462.1 一种新型骨化二醇(25-羟基维生素D3)分离纯化方法