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4’,6-二脒基-2-苯基吲哚二盐酸盐(4’,6-Diamidino-2-phenylindoledihydrochloride，简称DAPI，CAS:28718-90-3)，是一种重要的荧光染料。其常用于细胞凋亡检测，对细胞染色后用荧光显微镜观察或流式细胞仪检测，也用于普通细胞核染色及某些特定情况下的双链DNA染色。4’,6-二脒基-2-苯基吲哚二盐酸盐可穿透细胞膜与细胞核双链DNA结合发挥标记作用，产生比自身强20多倍荧光，对双链DNA的染色灵敏度要比经典染色剂溴化乙啶高很多倍。其对细胞染色后在显微镜下看显蓝色荧光细胞，荧光效率几乎为100％，且对活细胞无毒副作用。
室温搅拌下，向5L反应瓶中依次加入6-氯吲哚(303.18g，2.0mol)和1.5L乙二醇二乙醚，搅匀；再向其中加入氯化镍(5.18g，0.04mol)，三氯化铝(13.33g，0.1mol)，4,4'-二甲基-2,2'-联吡啶(18.42g，0.1mol)，锌粉(65.39g，1mol)，甲酰胺(180.16g，4.0mol)，搅匀。加完后，在100℃反应10小时，反应完成。
反应液冷却至40℃，过滤，滤除不溶物。滤液减压蒸馏回收大部分溶剂，剩余物倒入2L水中，用3x 1L乙酸乙酯萃取。合并萃取液，用食盐水洗涤，萃取液旋干，用甲苯/叔丁基甲醚重结晶得到267.26g白色固体粉末状产品，收率94％。
室温搅拌下，向5L反应瓶中依次加入上一步制得的6-氰基吲哚(267.26g，1.88mol)和2L N,N-二甲基乙酰胺，搅匀。再向其中加入4-氯苯甲腈(258.63g，1.88mol)，醋酸钾(534.52g，3.76mol)，氯[1,3-双(2,6-二异丙苯基)咪唑-2-亚基]铜(I)(87mg，0.18mmol)，搅匀。反应液加热至110℃加热反应6小时，反应完成。
反应液冷却至室温，减压蒸馏回收大部分N,N-二甲基乙酰胺。剩余物加入到2L乙酸乙酯中，用饱和食盐水洗涤2次，旋干。剩余物用甲苯/叔丁基甲醚重结晶得到416.19g棕黄色固体粉末产品，收率91％。核磁数据：1H NMR(400MHz，D6-DMSO)：δ12.36(s，1H)，8.12(d，2H)，7.98(d，2H)，7.90(s，1H)，7.77(d，1H)，7.38(dd，1H)，7.30(d，1H)。
室温搅拌下，向5L反应瓶中加入苄醇(1479.36g，13.68mol)，冷却到0℃，向其中滴加乙酰氯(536.94g，6.84mol)，半小时滴完。滴完后，保温搅拌1小时。
向反应液中加入上一步制得的6-氰基-2-(4’-氰基苯基)吲哚(416.19g，1.71mol)，加完后，自然升温至室温，保温搅拌12小时，点板确认反应完全。该反应液不经进一步处理，直接进行下一步反应。
向上一步反应液中滴加氯化铵(365.88g，6.84mol)与1.5L乙醇的混合液。滴完后，反应液加热到60℃，保温搅拌反应6小时，反应完全。
反应液冷却至0℃，析出大量黄色固体。过滤，收集滤饼，滤饼用少量18％盐酸洗涤2次，然后冻干得到533.05g黄色固体粉末状产品，两步收率89％。四步反应总收率76％。产品HPLC纯度：99.73％。核磁数据：1H NMR(400MHz，D6-DMSO)：δ12.55(s，1H)，9.41(s，2H)，9.29(s，2H)，9.11(s，2H)，8.91(s，2H)，8.22(d，2H)，7.98(d，3H)，7.79(d，1H)，7.47(dd，1H)，7.32(d，1H)。
[1] [中国发明] CN202110294976.4 4’,6-二脒基-2-苯基吲哚二盐酸盐的制备方法