当前位置: 首页 > CAS号数据库 > 941678-49-5 > 941678-49-5/鲁索利替尼的药理研究

手机扫码访问本站

微信咨询

941678-49-5/鲁索利替尼的药理研究

背景及概述[1][2]

鲁索利替尼(Ruxolitinib)是蛋白激酶JAK1和JAK2的小分子抑制剂,于2011年FDA批 准首个治疗骨髓纤维化药物,2014年新增适应症,用于治疗真性红细胞增多症患者。2015年全球的市场销售额为10.1亿美元,2016年全球的市场销售额为14.34亿美元。

中间体合成[1]

(R)-3-(4-溴-1H-吡唑-1-基)-3-环戊基丙腈是合成鲁索利替尼(ruxolitinib)重要中间体。2011年,FDA批准鲁索利替尼用于患有中或高风险骨髓纤维化患者的治疗,2014年, FDA批准鲁索利替尼用于治疗真性红细胞增多症。目前国外报道该药也可用于治疗斑秃,在这 方面的研究工作在进一步开展中,因此,该药的研究具有重要意义。

CN201610008099.9提供一种方法简单、产率高、成本低的(R)-3-(4-溴-1H-吡唑-1- 基)-3-环戊基丙腈的合成方法。为了实现上述目的,本发明的技术方案是:(R)-3-(4-溴-1H-吡唑-1-基)-3-环戊 基丙腈的合成方法,是以3-环戊基-2-氰基丙烯酸烷基酯为原料,在手性方酰胺催化剂存在 下与4-溴-1H-吡唑经Michael加成、水解、脱羧得(R)-3-(4-溴-1H-吡唑-1-基)-3-环戊基丙腈。本发明的方法可用下述反应式表示:

鲁索利替尼的药理研究

实施例:

(R)-3-(4-溴-1H-吡唑-1-基)-3-环戊基丙腈的合成方法,通过下述步骤实现:

1)(R)-3-(4-溴-1H-吡唑-1-基)-2-氰基-3-环戊基丙酸乙酯的制备

向25ml单口瓶中加入3-环戊基-2-氰基丙烯酸乙酯1.93g(0.01mol),手性方酰胺 催化剂化合物Ⅲa 0.45g(0.001mol),4-溴-1H-吡唑1.59g(0.0108mol),15mL干燥甲苯,-20 ℃下反应10小时左右,TLC跟踪反应,反应毕,减压浓缩移除溶剂,残留物直接用于下步反 应。

2)(R)-3-(4-溴-1H-吡唑-1-基)-3-环戊基丙腈的制备

向步骤1)的残留物中加入质量分数为25%的氢氧化钠溶液2.1g(0.013mol NaOH),升温至65℃回流8小时左右至TLC跟踪反应至水解完全,用质量分数为35%的盐酸调 pH至3左右,升温至100℃回流,至TLC跟踪反应脱羧完全,冷却至室温,加入10mL甲苯,静止 分层,水层用甲苯(3*10mL)萃取,合并有机层,有机层用饱和食盐水洗涤,用硫酸镁干燥,减 压回收甲苯得到(R)-3-(4-溴-1H-吡唑-1-基)-3-环戊基丙腈粗产品2.35g,对映体超量 91%ee。粗产品用10mL正己烷重结晶得到白色针状结晶2.14g,产率为80%,对映体超量 98%ee。

目标产物的氢谱、碳谱及高压液相色谱的检测数据如下:

1H NMR(400M Hz,CDCl3)δ(ppm):7.52-7.51(m,2H),4.12(d d d,J=9.8,8.5,4Hz, 1H),3.02(d d,J=17.3,8.5Hz,1H),2.86(dd,J=17.3,4.0Hz,1H),2.48(m,1H),1.96-1.88 (m,1H),1.78-1.45(m,5H),1.19(m,2H);

13C NMR(100.61M Hz,CDCl3)δ(ppm):140.8,129.3,116.8,93.4,64.5,30.2,30.0, 25.5,24.9,23.5;

HPLC(Chiracel AD-H,λ=210nm,n-Heptane:EtOH=90:10,1.0ml/min):TR= 26.8min(major peak)and 22.3min;91%ee(98%ee after recrystalization)

药理研究[2]

谢旭磊等人研究了JAK2V617F突变阳性骨髓增殖性肿瘤(MPN)组织中JAK2V617F突变量与磷酸化Janus激酶2(p-JAK2)、细胞因子信号转导抑制蛋白1(SOCS1)、含SH2结构域蛋白酪氨酸磷酸酶1(SHP1)表达的关系,并探讨JAK2抑制剂鲁索利替尼(ruxolitinib)对JAK2V617F突变阳性人红白血病细胞系HEL细胞的增殖和HEL细胞中SOCS1、SHP1表达的影响。

方法纳入2012年7月至2016年8月于河北省人民医院和保定市第一医院就诊的48例JAK2V617F突变阳性的MPN患者为MPN组,同期24例贫血患者为对照组。采用免疫组织化学法检测骨髓组织标本中p-JAK2、SOCS1和SHP1的蛋白表达水平。SOCS1、SHP1蛋白表达量与JAK2V617F突变量的相关分析采用Spearman等级相关分析。用不同浓度(50、100、250、500、1 000 nmol/L)的鲁索利替尼处理HEL细胞后,采用CCK-8法检测HEL细胞的活力,q PCR法检测MPN组织和HEL细胞中JAK2V617F突变量以及HEL细胞中JAK2、SOCS1、SHP1 m RNA表达水平,蛋白质印迹法检测HEL细胞中JAK2、p-JAK2、SOCS1、SHP1的蛋白表达水平。

结果 (1)MPN组织中JAK2V617F/JAK2比值为(57.33±20.82)%,对照组为0%。MPN患者骨髓细胞质中p-JAK2、SOCS1、SHP1蛋白质表达量与对照组相比差异均有统计学意义(P均<0.01)。

(2)MPN组织中SOCS1、SHP1蛋白表达量均与JAK2V617F突变量呈负相关(r=-0.648、-0.692,P均<0.05)。JAK2V617F/JAK2比值<50%MPN患者的SOCS1、SHP1蛋白表达水平高于JAK2V617F/JAK2比值≥50%的MPN患者(P均<0.01),p-JAK2的蛋白表达水平低于JAK2V617F/JAK2比值≥50%者(P<0.01)。

(3)250 nmol/L鲁索利替尼处理24、48、72 h后,HEL细胞活力分别为(60.06±3.87)%、(52.05±2.88)%、(36.43±2.01)%。随着鲁索利替尼浓度的增加,HEL细胞中JAK2的m RNA和蛋白表达与p-JAK2的蛋白表达水平逐渐降低(P<0.01,P<0.05),SOCS1和SHP1的m RNA和蛋白表达逐渐增加(P均<0.01)。

结论鲁索利替尼能够抑制HEL细胞中JAK2的m RNA和蛋白表达及其磷酸化水平,增加SOCS1、SHP1 m RNA和蛋白表达,降低HEL细胞的活力。

主要参考资料

[1] CN201610008099.9 鲁索利替尼中间体(R)-3-(4-溴-1H-吡唑-1-基)-3-环戊基丙腈的合成方法

[2] 谢旭磊,杨圣俊,郝洪岭,王素云,王红杰,齐峰,成志勇,刘贵敏.SOCS1、SHP1在JAK2V617F突变阳性骨髓增殖性肿瘤中的表达及鲁索利替尼的调控作用[J].第二军医大学学报,2018,39(01):74-80.