EA.hy926人脐静脉融合细胞
细胞介绍
在 PEG 胁迫下，将原代培养的人脐静脉细胞与抗硫鸟嘌呤的 A549克隆株融合，构建了人脐静脉细胞株,EA.hy926。融合子在 HAT 培养基上生长并以八因子相关抗原筛选。EA.hy926己经过 100次以上的群体倍增(PDLs)。电镜照片显示 Weibel-Palade 小体的细胞质分布以及组织特异性的细胞器，分化的内皮细胞特性如血管生成，体内平衡/血栓形成，血压及炎症反应。
细胞特性
1) 来源：静脉内皮细胞与 A549细胞株融合
2) 形态：梭形，贴壁生长
3) 含量：>lxl06 个/mL
4) 污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5) 规格：T25瓶或者 lmL 冻存管包装
运输和保存：使用含有优质胎牛血清的 2ml 冻存管发送存活细胞。收到细胞后，可在1000RPM，常温条件下，离心 5min 后，于洁净操作台弃去上清，加入推荐 使用的培养基后转移至 l〇cm 培养皿或者 T25培养瓶中培养，传代达到细胞生长状态良好时， 再进行冻存。具体操作见细胞培养步骤。
细胞用途：仅供科研使用。
细胞培养步骤
1) 培养基及培养冻存条件准备：
1. 准备 DMEM-H 培养基(DMEM-H，GIBCO,货号 12800017,添加 NaHC031.5g/L)，90%;胎牛血清，10%。（DMEM 液体培养基：GIBCO，11995-065)。
2. 培养条件：气相：空气，95%;二氧化碳，5%。温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。
3. 冻存液：90%完全培养基，10%DMSO,现用现配。液氮储存。
EA.hy926人脐静脉融合细胞
2) 细胞处理：
复苏细胞：将含有 lmL 细胞悬液的冻存管在 37°C 水浴中迅速摇晃解冻，加 入 4mL 培养基混合均匀。在 1000RPM 条件下离心 4分钟，弃去上清液，补 加 l-2mL 培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将 细胞悬液加入 l〇cm皿中，加入约 8ml 培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。
细胞传代：如果细胞密度达 80%-90%，即可进行传代培养。对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：弃去培养上清，用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2次。力口 2m 丨消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养瓶中，置于 37°C 培 养箱中消化 1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部 分变 圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止 消化。按 6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在 1000RPM 条件下离心 4分 钟， 弃去上清液，补加 l-2mL 培养液后吹匀。将细胞悬液按 1: 2到 1: 5的比例分到新的含 8ml 培养基的新皿中或者瓶中。
细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃去培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，加入约 lml 含血清的培养基后 加入冻存管中，再添加 1〇%DMSO 后进行冻存。
注意事项：
收到细胞后，若发现干冰己挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们联系。所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。
