MCF-7/Adr人乳腺癌阿霉素耐药细胞
细胞特性
1) 来源：乳腺癌
2) 形态：上皮细胞样贴壁生长
3) 含量：>lxl06 个/mL
4) 污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5) 规格：T25瓶或者 lmL 冻存管包装
运输和保存：可选择干冰运输及发送复苏存活细胞方式：（1)干冰运输，收到后 立即转入液氮冻存或直接复苏；（2)存活细胞，收到后应继续生长，传代达到细 胞生长状态良好时，再进行冻存。具体操作见细胞培养步骤。
细胞用途：仅供科研使用。
细胞培养步骤
1) 培养基及培养冻存条件准备： 注意：培养瓶里面的培养液是不含药物的，待细胞长到 70-80%汇合度时，去掉 培养液，加含 500ng/ml 阿霉素药物的培养液，放入培养箱，这段时间会有少部 分细胞悬浮起来，属于正常情况，通过换液可以去掉，等细胞长满就可以消化 传代 了，这时可以一直用含药物培养基来培养细胞，两代之后就可以将药物浓度提?{到 l〇〇〇ng/ml，细胞冻存时不要在培养基中加药物。
1. 准备 RPIVM-1640 培养基(RPMI-1640:GIBCO,货号 21875-091);北美胎牛血清
(United States, GIBCO，货号 16000-044)，10%;双抗 1%，添加 2mML-GUJ， 添加 luM Adr。
2. 培养条件：气相：空气，95%;二氧化碳，5%。温度：37摄氏度，培养箱 湿度为
70%-80%。
3. 冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。液氮储存。
2) 细胞处理：
1. 复苏细胞：将含有 lmL 细胞悬液的冻存管在 37°C 水浴中迅速摇晃解冻，加入 4mL培养基混合均匀。在 1000RPM 条件下离心 4分钟，弃去上清液，补 加 l-2mL 培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入 l〇cm 皿中，加入约 8ml 培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。
2. 细胞传代：如果细胞密度达 80%-90%，即可进行传代培养。 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2次。力口 2m 丨消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养瓶中，置于 37°C 培养箱中消化 1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部 分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。按 6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在 1000RPM 条件下离心 4分 钟，弃 去上清液，补加 l-2mL 培养液后吹匀。将细胞悬液按 1: 2到 1: 5的比例分到新的含 8ml 培养基的新皿中或者瓶中。
MCF-7/Adr人乳腺癌阿霉素耐药细胞
细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。
下面 T25瓶为例；
细胞冻存时，弃去培养基后，PBS 清洗瓶底 1-2次后加入 lml 胰酶，细胞变圆脱落后，加入 2ml 完全培养基终止消化，可使用血球计数板计数。1000RPM 离心 5分钟去掉上清。用血清重悬浮，加 DMSO 至最终浓度为 10%。加入 DMSO 后迅速混匀，按每 lml 的数量分配到冻存管中，注意冻存 管做好标识。本公司按每个冻存管细胞数目大于 1X106个细胞冻存。 将冻存管置于程序降温盒中，放入-80度冰箱，至少 2个小时以后转入液 氮灌储 存。记录冻存管位置以便下次拿取。
注意事项：
收到细胞后，若发现干冰己挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们联系。所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。
