HK-2人肾皮质近曲小管上皮细胞
细胞介绍
该细胞属源于正常肾的近曲小管细胞，通过导入 HPV-16 E6/E7基因而获得永生 化。将含有 HPV-16 E6/E7基因的重组的逆转录病毒载体 pLXSN 16 E6/E7转染外生 包装细胞 Psi-2，Psi-2细胞产生的病毒再去感染兼嗜性包装细胞系 PA317，最后 将 PA317产生的病毒颗粒导入正常的肾皮质近曲小管细胞。尽管 pLXSN 16 E6/E7 中含有新霉素抗性，但未用 G418筛选转导克隆。Southern 和 FISH 分析显示 HK-2 细胞来源于单克隆。PCR 检测证实 HK-2细胞基因组中含有 E6/E7基因。
细胞特性
来源：正常肾
形态：上皮细胞样
含量：>lxl06 个/mL
污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
规格：T25瓶或者 lmL 冻存管包装
运输和保存：可选择干冰运输及发送复苏存活细胞方式：（1)干冰运输，收到后立即转入液氮冻存或直接复苏；（2)存活细胞，收到后应继续生长，传代达到细胞生长状态良好时，再进行冻存。具体操作见细胞培养步骤。
细胞用途：仅供科研使用。
细胞培养步骤
培养基及培养冻存条件准备：
1. 准备角化培养基（Defined K-SFM，货号：10785-012);角化因子（500X);添力口 5ng/mLEGF;双抗 1%。
2. 培养条件：气相：空气，95%;二氧化碳，5%。温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。
3.冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。液氮储存。
细胞处理：
1. 复苏细胞：将含有 lmL 细胞悬液的冻存管在 37°C 水浴中迅速摇晃解冻，加入 4mL培养基混合均匀。在 1000RPM 条件下离心 4分钟，弃去上清液，补加 l-2mL 培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将 细胞悬液加入 l〇cm 皿中，加入约 8ml 培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。
细胞传代：如果细胞密度达 80%-90%，即可进行传代培养。
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法： 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2次。力口 2m 丨消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养瓶中，置于 37°C 培 养箱中消化 1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部 分变 圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。按 6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在 1000RPM 条件下离心 4分 钟，弃 去上清液，补加 l-2mL 培养液后吹匀。将细胞悬液按 1: 2到 1: 5的比例分到新的含 8ml 培养基的新皿中或者瓶中。
HK-2人肾皮质近曲小管上皮细胞
细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。
下面 T25瓶为例；
细胞冻存时，弃去培养基后，PBS 清洗瓶底 1-2次后加入 lml 胰酶，细 胞变圆脱落后，加入 2ml 完全培养基终止消化，可使用血球计数板计数。1000RPM 离心 5分钟去掉上清。用血清重悬浮，加 DMSO 至最终浓度为 10%。加入 DMSO 后迅速混匀，按每 lml 的数量分配到冻存管中，注意冻存 管做好标识。本公司按每个冻存管细胞数目大于 1X106个细胞冻存。 将冻存管置于程序降温盒中，放入-80度冰箱，至少 2个小时以后转入液 氮灌储 存。记录冻存管位置以便下次拿取。
注意事项：
收到细胞后，若发现干冰己挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们联系。所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注 意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。
