水泡性口炎病毒印第安纳型RT-PCR试剂盒

品牌：纪宁生物

货号：JN28323

规格： 50次

联系方式：021-54721350

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产品详情

水泡性口炎病毒印第安纳型RT-PCR试剂盒
产品及特点：
水泡性口炎(Vesicular Stomatitis, VS)是一种由弹状病毒科水泡病毒属的一些病毒引起的人畜共患传染病，感染马、牛、猪后主要表现为在舌背侧、齿酿、口唇、蹄冠状带、乳房及包皮等处皮肤出现大量的水疙和剥蚀性病灶。引起 VS 的VSV，为弹状病毒科，水泡病毒属病毒。到目前为止至少有 28 种水泡病毒可感染脊椎动物和无脊椎动物。VS 感染人后表现为类流感症状。本产品可用于在科研领域快速定量检测水泡性口炎病毒印第安纳型。
1. 一站式，用户不需要单独准备每种成分，包括引物和对照。
2. 根据水泡性口炎病毒印第安纳型的保守基因序列设计的引物，具有良好的特异性。
3. 灵敏度可以达到 1000 拷贝/反应。
4. 使用一管式 RT-PCR 技术，RT 和 PCR 两步在一个试管内完成，不需要中间转移样品，降低了操作误差和可能的污染。
5. 本产品足够 50 次 20μL 体系的 RT-PCR。
6. 本产品只能用于科研，不能用于临床。
规格及成分：

编号

成分

规格

试剂一

5×双酶一管式 RT-PCR Buffer

200 μL（橘黄盖）

试剂二

MMLV-Taq Mix

75 μL（红盖）

试剂三

超纯水

1 mL（亮黄盖）

试剂四

水泡性口炎病毒印第安纳型 RT-PCR 引物混合液

100 μL（白盖）

试剂五

水泡性口炎病毒印第安纳型 RT-PCR 阳性对照（1×10E8 /μL）

50 μL（黄盖）

试剂六

使用手册

1 份

注：为避免扩散传染性病原，本产品不提供活体样品做阳性对照，只提供专一的DNA 片段作为阳性对照。
运输及保存：
低温运输，-20℃保存，保存期限为 12 个月。收到货后阳性对照需要跟其他成分分开放置，因为其容易污染其他成分，造成假阳性。
自备试剂：
样品 RNA。
使用方法：
一、样品 DNA 的制备：
1. 如果有 N 个样品，必须设置 N+2 个提取，多出的一个是 PC（样品制备阳性对照），一个是NC（样品制备阴性对照）。可以用 10μL 水泡性口炎病毒印第安纳型 PCR阳性对照的 1000 倍稀释液作为制备的阳性对照。可以用水作为制备的阴性对照。制备所得成为样品 RNA。
2. 用自选方法纯化 N+2 个样品的 RNA，本试剂盒跟市场上大多数病毒 RNA 提取试剂盒兼容。可以选购本公司的柱式病毒 RNAout。
二、设置RT-PCR反应(20μL体系)：
3. 如果有 N+2 个样品，则标记 N+4 个 PCR 管(额外增加的两个管一个是RT-PCR 阳性对照，另一个是 RT-PCR 阴性对照)并按照下表在 PCR 管中加入下列成分：

过程	温度	时间
逆转录	42℃	30 min
预变性	95℃	5 min
PCR 反应35个循环	95℃	30 sec
	58℃	30 sec
	72℃	20 sec
最后延伸	72℃	7 min

4. 上机进行 RT-PCR，RT-PCR 反应参数为:

过程	温度	时间
逆转录	42℃	30 min
预变性	95℃	5 min
PCR 反应35个循环	95℃	30 sec
	58℃	30 sec
	72℃	20 sec
最后延伸	72℃	7 min

三、电泳检测：
5. 琼脂糖电泳检测扩增效果。如果阴性对照有扩增产物或阳性对照无扩增产物，则说明实验失败，需要分析实验失败的原因。只有在阴性对照没有扩增产物、阳性对照必须有预期条带出现，才有必要分析样品的实验结果，如果有预期片段大小的扩增产物则为阳性，如果无则为阴性。

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编号	成分	规格
试剂一	5×双酶一管式 RT-PCR Buffer	200 μL（橘黄盖）
试剂二	MMLV-Taq Mix	75 μL（红盖）
试剂三	超纯水	1 mL（亮黄盖）
试剂四	水泡性口炎病毒印第安纳型 RT-PCR 引物混合液	100 μL（白盖）
试剂五	水泡性口炎病毒印第安纳型 RT-PCR 阳性对照（1×10E8 /μL）	50 μL（黄盖）
试剂六	使用手册	1 份