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编号 |
成分 |
规格 |
试剂一 |
2×Probe qPCR MagicMix |
500μL(本色盖) |
试剂三 |
荧光PCR专用模板稀释液 |
1mL(黄盖) |
试剂二 |
睡眠嗜血杆菌qPCR引物混合液 |
100μL(白盖) |
试剂四 |
睡眠嗜血杆菌qPCR探针 |
50μL(棕色管) |
试剂五 |
睡眠嗜血杆菌qPCR阳性对照照(1×10E8/μL) |
50μL(红盖) |
|
使用手册 |
1份 |
成份
N+2 个样品管
PCR 阴性对照管
标准曲线样品管
(2-7管)
2×Probe qPCR MagicMix
10μL
10μL
各10μL
睡眠嗜血杆菌qPCR探针
1μL
1μL
各1μL
睡眠嗜血杆菌探针法qPCR引物混合液
2μL
2μL
各2μL
N+2个待测DNA模板
7μL
--
--
超纯水
--
7μL
--
第7步所得标准曲线样品稀释液(2-7号)
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各7μL(2号样到2号管,3号样到3号管…)
11. 盖上盖子后上机,按下面参数进行PCR:
过程 |
温度 |
时间 |
预变性 |
95℃ |
3 min |
PCR反应40个循环 |
95℃ |
15 sec |
60℃ |
1 min(采集FAM通道的荧光信号) |
12. 如果把本试剂盒用于定量检测,则以阳性对照浓度的 log 值为横轴,以 Ct 值为纵轴,绘制标准曲线。再以待测样品的 Ct 值从标准曲线上推算出样品 RNA浓度的 log 值,再推算出其浓度。
13. 如果把本试剂盒用于定性检测,只判断阳性或阴性,则阴性对照 Ct 必须大于或等于 40。阳性对照必须有荧光对数增长,有典型扩增曲线,Ct 值应该小于或等于 30。对待测样品,如果其 Ct 大于或等于 40 则为阴性,如果小于或等于 35 则为阳性。如果在 35-40 之间,则重复一次。若重复结果 Ct值小于 40,扩增曲线有明显起峰,该样本判断为阳性,否则为阴性。