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产品简介:
腺苷脱氨酶(ADA,EC 3.5.4.4)是一种琉基酶,是嘌呤核苷酸代谢的关键酶,与机体细胞的免疫活性有重要关系。腺苷脱氨酶(ADA)催化腺嘌呤核苷水解,产生次黄嘌呤核苷和氨,利用氨在强碱的环境下与次氯酸盐和苯酚作用,生成水溶性染料靛酚蓝,溶液颜色稳定。其在 630nm 处有特征吸收峰,通过检测氨增加的速率,即可计算该酶活性大小。
试剂盒组成和配制:
试剂名称
规格
保存要求
备注
提取液1
液体60mL×1瓶
4℃保存
试剂一
液体20mL×1瓶
4℃保存
试剂二
粉剂mg×2瓶
4℃保存
临用前甩几下使粉体落入底部,每瓶再加
11mL蒸馏水溶解备用。
试剂三
液体20mL×1瓶
4℃保存
试剂四
液体24mL×1瓶
4℃保存
试剂五
液体12mL×1瓶
4℃保存
试剂六
A:液体7mL×4瓶
4℃保存
临用前取 60μL的B液进一瓶A液中,混
匀后作为试剂六使用。混匀后的试剂六一
周内用完。
B:液体μL×1支
标准管
液体mL×1支
4℃保存
若重新做标曲,则用到该试剂。
所需的仪器和用品:
可见分光光度计、1mL 玻璃比色皿(光径 1cm)、台式离心机、可调式移液枪、研钵、冰和蒸馏水。
腺苷脱氨酶(ADA)活性测定:
1、样本制备:
① 组织样本:
称取约 0.1g 组织(水分足的样本可取 0.2-0.5g),加入 1mL 提取液;进行冰浴匀浆。12000rpm,4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。
[注]:也可以按照组织质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例提取。
② 液体样本:直接检测;若浑浊,离心后取上清检测。