英文名称 : Lacate Dehydrogenase(LDH) Activity Assay Kit
产品包装 : 盒装
产品规格 : 100T/48S
储存条件 : -20℃
检测方法 : 微量法
有 效 期 : 6个月
产品组成:
试剂名称
|
规格
|
保存条件
|
提取液
|
液体60mL×1瓶
|
2-8℃保存
|
试剂一
|
液体7 mL×1瓶
|
2-8℃保存
|
试剂二
|
粉剂×1 支
|
-20℃保存
|
试剂三
|
液体25mL×1瓶
|
2-8℃保存
|
试剂四
|
液体 60 mL×1瓶
|
2-8℃保存
|
标准品
|
液体1 mL×1支
|
2-8℃保存
|
产品说明:
L-LDH(EC 1.1.1.27)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,是糖酵解途径的末端酶, 催化丙酮酸与L-乳酸之间的可逆反应,伴随着NAD+/NADH之间互变。
L-LDH催化NAD+氧化L-乳酸生成丙酮酸, 丙酮酸进一步与2,4-二硝基苯肼作用生成丙酮酸二硝基苯腙,在碱性溶液中显棕红色,颜色深浅与丙酮酸浓度成正比。
注意:实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者 增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品:
可见分光光度计,恒温水浴锅,台式离心机,可调式移液器,1mL玻璃比色皿,研钵/匀浆器/细胞超声破碎仪,冰和蒸馏水。
注意事项:
1.ΔA大于1.3或者小于0.01时,建议将样本用蒸馏水稀释或者增大样本量进行实验,注意同步修改计算公式。
实验实例:
1. 称取0.103g景天叶片, 加入1mL提取液, 进行冰浴匀浆, 8000g ,4℃离心10min,取上清置冰上待测。之后按 照测定步骤操作,用96孔板测得计算ΔA=A测定管-A对照管=0.275-0.199=0.076,带入标曲y=0.5218x+0.0063, R2=0.9983,得x=0.134 µmol/mL,计算乳酸脱氢酶活性得:
L-LDH(U/g质量)=66.67 ×x÷W =86.74 U/g
2. 称取0.109 g兔肝,加入1mL提取液,进行冰浴匀浆,8000g,4℃离心10min,取上清用蒸馏水稀释80倍后置冰 上待测。之后按照测定步骤操作,用96孔板测得计算ΔA=A测定管-A对照管=0.795-0.132=0.663,带入标曲 y=0.5218x+0.0063,R2=0.9983,得x=1.259 µmol/mL,计算乳酸脱氢酶活性得:
L-LDH(U/g质量)=66.67 ×x÷W×稀释倍数=61605.53 U/g
3. 取10μL马血清之后按照测定步骤操作, 用96孔板测得计算ΔA=A测定管-A对照管=0.415-0.161=0.254,带入标曲y=0.5218x+0.0063 ,R2=0.9983,得x=0.475 µmol/mL,
计算乳酸脱氢酶活性得:
L-LDH(U/mL)=66.67×x =31.67U/mL