英文名称 :Cysteinyl Sulfoxide Lyase(CSL)Activity Assay Kit
产品包装 :盒装
产品规格 :100T/48S
储存条件 :2-8℃
检测方法 :微量法
有 效 期 :6个月
产品组成:
试剂名称
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规格
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保存条件
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提取液
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液体60mL×1瓶
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2-8℃保存
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试剂一
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液体1.5mL×1支
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2-8℃保存
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试剂二
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粉剂×1瓶
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2-8℃保存
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试剂三
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液体3mL×1瓶
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2-8℃保存
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试剂四
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液体3mL×1瓶
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2-8℃保存
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试剂五
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液体12mL×1瓶
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2-8℃保存
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标准品
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液体1mL×1支
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2-8℃保存
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产品说明:
半胱氨酰亚砜裂解酶,简称蒜酶,又名蒜氨酸酶。半胱氨酰亚砜裂解酶几乎存在于所有葱属植物中,如大蒜,洋葱,韭菜等。蒜氨酸酶存在于液泡内,其天然底物蒜氨酸存在于细胞质中;蒜氨酸酶与蒜氨酸接触并催化产生蒜素和顺、反式阿霍烯并生成丙酮酸和氨等副产物,也是大蒜等植物辛辣气味的主要来源。
半胱酰胺亚砜裂解酶可以催化S-甲基-L-半胱氨酸亚砜生成丙酮酸。丙酮酸可与2,4-二硝基苯肼反应生成2,4-二硝基苯腙,在碱性条件下显棕红色;测定505nm吸光度的变化,即可计算CSL酶活性。
注意:实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验,如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品:
可见分光光度计/酶标仪、水浴锅/恒温培养箱、台式离心机、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研钵/匀浆器、蒸馏水和冰。
注意事项:
1.如果测定结果∆A测定>1,可以对样本用蒸馏水进行稀释或者缩短第一步反应时间;吸光值较小,可以加大样本量或者延长第一步反应时间至1h或者更长时间。注意计算时同步修改计算公式。
2.对于初次测定样本,建议将样本匀浆液用蒸馏水进行梯度稀释后测定,选取佳的稀释倍数。洋葱、香菇、大蒜类样本建议直接稀释4-10倍后再进行佳稀释倍数摸索。(实验室洋葱进行了8倍稀释,蒜进行了64倍稀释)
实验实例:
1、称取0.1233g蒜样本,加入提取液进行冰浴匀浆,上清用蒸馏水稀释64倍,按照测定步骤操作,用96孔板测
得计算∆A测定=A测定-A对照=0.46-0.113=0.347,∆A标准=A标准-A标准空白=0.551-0.064=0.487,带入公式计算:CSL活性(U/g质量)=0.0208×∆A测定÷∆A标准÷W×F=7.693U/g质量。
2、称取0.1263g洋葱样本,加入提取液进行冰浴匀浆,上清稀释4倍,按照测定步骤操作,用96孔板测得计算
∆A测定=A测定-A对照=0.477-0.382=0.095,∆A标准=A标准-A标准空白=0.551-0.056=0.487,带入公式计算:CSL活性(U/g质量)=0.0208×∆A测定÷∆A标准÷W×F=0.169U/g质量。