中文名称 ： 辅酶Ⅰ NAD(H)/含量检测试剂盒(WST显色法)/100T
英文名称 ： CoenzymeⅠNAD(H) Content Assay Kit (WST colorimetry)
产品包装 ： 盒装
产品规格 ： 100T/48S
储存条件 ： -20℃
检测方法 ： 微量法
有 效 期 ： 6个月
产品组成 ：
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试剂名称
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规格
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保存条件
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酸性提取液
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液体25mL×1瓶
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2-8℃保存
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酸性提取液
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液体25mL×1瓶
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2-8℃保存
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试剂一
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液体6mL×1瓶
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2-8℃保存
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试剂二
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液体2mL×1瓶
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2-8℃保存
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试剂三
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液体4mL×1瓶
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2-8℃保存
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试剂四
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液体0.9mL×1支
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-20℃保存
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试剂五
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液体15mL×1瓶
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2-8℃保存
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NAD标准品
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粉剂×1支
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-20℃保存
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NADH标准品
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粉剂×1支
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-20℃保存
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产品说明：
辅酶I包括还原型和氧化型两种形式，在生物氧化中起传递氢的作用。氧化型辅酶I又称烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD+)是脱氢酶的辅酶，它在糖酵解、糖异生、三羧酸循环和呼吸链中发挥着不可替代的作用。中间产物会将脱下的氢递给NAD，使之成为NADH(还原型辅酶I)。
而NADH则会作为氢的载体，在呼吸链中通过化学渗透偶联的方式，合成ATP。NAD(H)在机体内有重要的生理意义，与物质代谢、能量代谢、抗细胞衰老、抗氧化以及一些疾病的发生密切相关。体内辅酶I含量降低会导致细胞损伤或衰亡。
分别用酸性和碱性提取液提取样本中NAD+和NADH，在1-mPMS作用下，WST-1可与NADH反应，产生水溶性formazan，在450nm下有特征吸收峰，而NAD+可被乙醇脱氢酶还原为NADH，进一步采用WST-1检测。
注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计/酶标仪、低温离心机、水浴锅，研钵/匀浆器、超声破碎仪、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、冰和蒸馏水。
注意事项：
1、反应过程中注意避光。
2、如果测定吸光值超过线性范围吸光值，可以增加样本量或者稀释样本后再进行测定。同步修改计算公式。
实验实例：
1、NAD+的测定：称取0.1g冬青叶片，按提取步骤提取后按照测定步骤操作，玻璃比色皿测得吸光值后计算ΔA测定=A测定-A对照=0.119-0.106=0.013，标准曲线y1=0.373x+0.0012,根据标曲得出x1=0.032，NAD+含量得：
NAD+(nmol/g质量)=x1÷W=0.32nmol/g质量。
NADH的测定：称取0.1g冬青叶片，按提取步骤提取后按照测定步骤操作，玻璃比色皿测得吸光值后计算ΔA测定=A测定-A对照=0.172-0.128=0.044，标准曲线y2=0.1479x,根据标曲得出x2=0.297，NADH含量得：
NADH(nmol/g质量)=x2÷W=2.97nmol/g质量。
2、NAD+ 的测定：称取0.1g小鼠肝脏，按提取步骤提取后按照测定步骤操作，玻璃比色皿测得吸光值后计算ΔA测定=A测定-A对照=0.119-0.105=0.014，标准曲线y1=0.373x+0.0012,根据标曲得出x1=0.034，NAD+ 含量得：
NAD+(nmol/g质量)=x1÷W=3.4nmol/g质量。
NADH的测定：称取0.1g小鼠肝脏，按提取步骤提取后按照测定步骤操作，玻璃比色皿测得吸光值后计算ΔA测定=A测定-A对照=0.145-0.112=0.033，标准曲线y2=0.1479x,根据标曲得出x2=0.223，NADH含量得：
NADH(nmol/g质量)=x2÷W=2.23nmol/g质量。
3、NAD+的测定：取0.1mL马血清，按提取步骤提取后按照测定步骤操作，玻璃比色皿测得吸光值后计算ΔA测定=A测定-A对照=0.114-0.097=0.017，标准曲线y1=0.373x+0.0012,根据标曲得出x1=0.042，NAD+含量得：
NAD+(nmol/g质量)=x1÷W=0.42nmol/g质量。
NADH的测定：取0.1mL马血清，按提取步骤提取后按照测定步骤操作，玻璃比色皿测得吸光值后计算ΔA测定=A测定-A对照=0.142-0.135=0.007，标准曲线y2=01479,根据标曲得出x2=0.047，NADH含量得：NADH(nmol/g质量)=x2÷W=0.47nmol/g质量。
