英文名称 ： CoenzymeⅡ NADP(H) Content Assay Kit (WST colorimetry)
产品包装 ： 盒装
产品规格 ： 100T/48S
储存条件 ： -20℃
检测方法 ： 微量法
有 效 期 ： 6个月
产品组成：
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试剂名称
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规格
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保存条件
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酸性提取液
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液体25 mL×1瓶
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2-8℃保存
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碱性提取液
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液体25 mL×1瓶
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2-8℃保存
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试剂一
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液体10 mL×1瓶
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2-8℃保存
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试剂二
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粉剂×1 支
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-20℃保存
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试剂三
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液体4mL×1瓶
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2-8℃保存
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试剂四 A
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粉剂×1支
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-20℃保存
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试剂四 B
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液体10mL×1瓶
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2-8℃保存
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试剂五
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液体25 mL×1瓶
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2-8℃保存
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NADP标准品
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粉剂×1 支
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-20℃保存
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NADPH标准品
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粉剂×1 支
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-20℃保存
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产品说明：
辅酶ⅡNADP(H)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，NADP+和 NADPH含量测定可以计算 NADP (NADPH + NADP+)含量和 NADPH/NADP+比值，其变化与磷酸戊糖途径和生物合成以及抗氧化反应密切相关。 NADPH/NADP+比值不仅是细胞氧化还原态的主要标志之一，而且在 PPP 途径、生物合成和抗氧化代谢中具有重要调控作用。
分别用酸性和碱性提取液提取样品中 NADP+和NADPH。在1-mPMS作用下，WST- 1可与NADPH反应，产生水溶性formazan，在450nm下有特征吸收峰， 而NADP+可被 6-磷酸葡萄糖脱氢酶还原为NADPH，进一步采用WST- 1检测。
注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计/酶标仪、低温离心机、水浴锅、研钵/匀浆器、超声破碎仪， 可调式移液器、微量玻璃比色皿 /96孔板、冰和蒸馏水。
注意事项：
1 、如果一次性测定样本数较多，可将试剂一、二、三按比例配成混合液。
2 、反应过程中注意避光。
3 、由于每一个测定管需要设一个对照管，本试剂盒100管可以测定48个NADP+或 NADPH。
4 、如果测定吸光值超过线性范围吸光值，可以增加样本量或者稀释样本后再进行测定。同步修改计算公式。
实验实例：
1. NADP+的测定：称取0.1g冬青叶片，按提取步骤提取后按照测定步骤操作，96孔板测得吸光值后计算ΔA测定=A测定-A对照=0.075-0.069=0.006，标准曲线 y1=0.2081x-0.0144,根据标曲得出 x1=0.098，NADP+含量得：
NADP+ (nmol/g质量)= x1÷W=0.98 nmol/g质量。
NADPH的测定：称取0.1g冬青叶片，按提取步骤提取后按照测定步骤操作，96 孔板测得吸光值后计算ΔA测定=A测定-A对照=0.155-0.110=0.045，标准曲线 y2=0.0478x-0.0188,根据标曲得出x2=1.335 ，NADPH含量得： NADPH (nmol/g质量) = x2÷W=13.35 nmol/g 质量。
2. NADP+的测定：称取0.1g小鼠肝脏，按提取步骤提取后按照测定步骤操作，96孔板测得吸光值后计算ΔA测
定=A 测定-A 对照=0.194-0.146=0.048，标准曲线 y1=0.2081x-0.0144,根据标曲得出 x1=0.3 ，NADP+含量得：
NADP+ (nmol/g 质量)= x1÷W=2.999nmol/g质量。
NADPH 的测定：称取0.1g小鼠肝脏，按提取步骤提取后按照测定步骤操作，96孔板测得吸光值后计算ΔA
测定=A 测定-A 对照=0.170-0.141=0.029，标准曲线 y2=0.0478x-0.0188,根据标曲得出 x2=1 ，NADPH 含量得：NADPH (nmol/g质量) = x2÷W=10 nmol/g质量。
3. NADP+ 的测定：取0.1mL牛血清，按提取步骤提取后按照测定步骤操作，96孔板测得吸光值后计算ΔA测定=A测定-A对照=0.077-0.067=0.010，标准曲线 y1=0.2081x-0.0144,根据标曲得出 x1=0.117 ，NADP+含量得：
NADP+ (nmol/mL)= 11×x1=1.29nmol/mL。
NADPH的测定：取0.1mL牛血清，按提取步骤提取后按照测定步骤操作，96孔板测得吸光值后计算ΔA 测
定=A测定-A对照=0.084-0.072=0.012，标准曲线y2=0.0478x-0.0188,根据标曲得出 x2=0.644，NADPH含量得：NADPH (nmol/mL)= 11×x2=7.088nmol/mL。
