英文名称 :Glutamate(Glu)Content Assay Kit (WST colorimetry)
储存条件 :-20℃
产品包装 :盒装
检测方法 :微量法
有 效 期 :6个月
产品规格 :100T/48S
产品组成:
试剂名称
|
规格
|
保存条件
|
试剂一
|
液体85mL×1瓶
|
2-8℃保存
|
试剂二
|
液体1.5mL×1支
|
2-8℃保存
|
试剂三
|
粉剂×2瓶
|
-20℃保存
|
试剂四
|
粉剂×2支
|
-20℃保存
|
试剂五
|
液体4mL×1瓶
|
2-8℃保存
|
标准液
|
液体0.5mL×1支
|
2-8℃保存
|
产品说明:
Glu广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,不仅是组成蛋白质的20种氨基酸之一,而且通过转氨基作用参与多种氨基酸合成,是生物体内主要氨基来源之一。此外,Glu还是味精的主要有效成分,常用做食品添加剂以及香料生产。
谷氨酸脱氢酶(GDH)催化谷氨酸和NAD生成α-酮戊二酸、NADH和NH4+,在1-mPMS作用下,WST-1可与NADH反应,产生水溶性formazan,计算谷氨酸含量。
注意:实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验,如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品:
可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研钵/匀浆器/超声破碎仪、冰、蒸馏水。
注意事项:
如果测定吸光值超过线性范围吸光值, 可以增加样本量或者稀释样本后再进行测定。
实验实例:
1 、称取约 0.1g 鼠肺, 加入 1mL 试剂一,冰浴研磨, 10000g,常温离心 10min 取上清,待测。之后按照测 定步骤操作,用 96 孔板测得计算 ΔA =A2 -A1=0.449-0.384=0.065,标准曲线 y=1.5338x+0.0091,根据标 曲得出 x=0.036,谷氨酸含量得:谷氨酸含量(µmol/g 质量) =x×V 样本÷(W÷V 样总×V 样本) =x÷W=0.36µmol/g。
2、吸取 0.04 mL 羊血清,按照测定步骤操作, 用 96 孔板测得计算 ΔA =A2-A1=0.379-0.105=0.274,标准曲
线 y=1.5338x+0.0091,根据标曲得出 x=0.173,谷氨酸含量得:
谷氨酸含量(μmol/mL)=x×V 样本÷V 样本=x=0.173μmol/mL。