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维生素D(VD)ELISA试剂盒

品牌:纪宁生物

货号:JN18023-0

规格:

联系方式:021-54721350

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产品详情

维生素D(VD)ELISA试剂盒

本试剂盒仅供体外研究使用,不用于临床诊断

本试剂盒用于体外定量检测血清、血浆、组织匀浆及相关液体样本中维生素D(VD)的含量。
有效期:6个月

保存条件:2-8℃


检测前准备工作:

1.请提前20分钟从冰箱中取出试剂盒,平衡至室温。
2.从冰箱中取出的浓缩洗涤液可能有结晶,属于正常现象;放置室温,轻摇均匀,待结晶完全溶解后再配置洗涤液。可将20ml浓缩洗涤液用蒸馏水或去离子水稀释配置成400ml工作浓度的洗涤液,未用完的放回4℃
3.20×洗涤缓冲液的稀释:蒸馏水按1:20稀释,即1份20×洗涤缓冲液加19份蒸馏水。

实验原理:
实验原理
本试剂盒应用酶联免疫竞争法测定标本中维生素D(VD)水平。用纯化的维生素D(VD)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中加入维生素D(VD),和HRP标记的维生素D(VD)抗原,使它们竞争结合,,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。样本颜色的深浅和样品中的维生素D(VD)的含量呈负相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中维生素D(VD)的含量。


操作步骤
1.加样:分别设标准孔、空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、待测样品孔。在酶标包被板上标准孔中加50微升,待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品最终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
2.加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。
3.温育:用封板膜封板后置37℃温育60分钟。
4.配液:将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用
5.洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。
6.显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟.
7.终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
8.测定:以空白孔调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。

计算
以标准物的浓度为横坐标,OD值为纵坐标,在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的回归方程式,将样品的OD值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。
注意事项
1.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。
2.浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。
3.各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间最好控制在5分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。
4.请每次测定的同时做标准曲线,最好做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本OD值大于标准品孔第一孔的OD值),请先用样品稀释液稀释一定倍数(n倍)后再测定,计算时请最后乘以总稀释倍数(×n×5)。
5.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
6.底物请避光保存。
7.严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
8.所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
9.本试剂不同批号组分不得混用。

检测范围:

20μg/L -2000μg/L

保存条件及有效期

1.试剂盒保存:2-8℃。
2.有效期:6个月


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