Caspase-5活性检测试剂盒20T/50T/100T

品牌：纪宁生物

货号：JN37868

规格： 50T 100T 20T

联系方式：021-54721350

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英文名称：Caspase-5Activity Assay Kit

储存条件：-20℃

产品包装：盒装

检测方法：比色法

有效期：6个月

产品规格：20T 、50T 、100T

产品组成：

产品说明：

Caspase是参与细胞凋亡过程的蛋白酶家族，包含10多个成员。Caspase-5分子量47.7kD，与ICE有51%的同源性，在过量表达时可诱导凋亡发生。

Caspase-5特异水解其多肽底物N-acetyl-Trp-Glu-His-Asp-p-nitroanilide(Ac-WEHD-pNA)，释放出游离的硝基苯胺pNA，后者呈黄色在405nm具有大吸收峰，采用可见光光度比色法进行测定，吸光度值对应于Caspase-5的水解活性。

注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：

可见分光光度计/酶标仪、100μL玻璃比色皿/96孔板、台式离心机、水浴锅/恒温培养箱、可调式移液器、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。

注意事项：

1、由于试剂二中含有还原剂（DTT），建议将样本用水稀释2倍后，用Bradford法测定蛋白浓度，以降低DTT对蛋白浓度测定的干扰。不建议使用BCA法测定蛋白浓度。

2、Caspase活性测定值低常见的原因是细胞未发生凋亡或细胞量太少，其次是观测时间不恰当。诱导凋亡时，并非剂量越大时间越长Caspase活性就越高。建议设置不同剂量和时间点如0、2、4、8、16、24小时，以检测佳的观察点。

3、所测样本的值高于标准曲线上限时，可用试剂二稀释样本后重新测定。

4、盖紧96孔板盖子并用封口膜密封。37ºC孵育，肉眼可见颜色变黄时的OD405值约为0.2，此时即可测定。颜色变化不明显可延长反应或过夜，但酶活性较强时，孵育时间过长将导致反应失去线性关系。