英文名称 ：Caspase-6Activity Assay Kit
储存条件 ：-20℃
产品包装 ：盒装
检测方法 ：比色法
有 效 期 ：6个月
产品规格 ：20T 、50T 、100T
产品组成：
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试剂名称/规格
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20T
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50T
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100T
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保存条件
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试剂一
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液体20mL×1瓶
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液体20mL×1瓶
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液体25mL×1瓶
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-20℃保存
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试剂二
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液体30mL×1瓶
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液体60mL×1瓶
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液体120mL×1瓶
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-20℃保存
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试剂三
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液体0.25L×1支
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液体0.55mL×1支
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液体0.55mL×2支
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-20℃保存
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标准品
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液体1mL×1支
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液体1mL×1支
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液体1mL×1支
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-20℃保存
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产品说明：
Caspase是参与细胞凋亡过程的蛋白酶家族，包含10多个成员。Caspase-6也称Mch-2，其前体蛋白被granzymeB剪切后形成活化的caspase-6二聚体，可诱导细胞凋亡。Caspase-6可剪切凋亡的关键调节蛋白PARP，剪切核膜上关键蛋白LaminA，其对于LaminA的识别位点是VEID。
本试剂盒测定原理基于Caspase-6特异水解其多肽底物Ac-VEID-pNA(N-acetyl-Val-Glu-Ile-Asp-p-nitroanilide)，释放出游离的硝基苯胺pNA，后者呈黄色在405nm具有大吸收峰，采用可见光光度比色法测定。其吸光度值对应于Caspase-6的水解活性。
注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计/酶标仪、100μL玻璃比色皿/96孔板、台式离心机、水浴锅/恒温培养箱、可调式移液器、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。
注意事项：
1、由于试剂二中含有还原剂（DTT），建议将样品用水稀释2倍后，用Bradford法测定蛋白浓度，以降低DTT对蛋白浓度测定的干扰。不建议使用BCA法测定蛋白浓度。
2、Caspase活性测定值低常见的原因是细胞未发生凋亡或细胞量太少，其次是观测时间不恰当。诱导凋亡时，并非剂量越大时间越长Caspase活性就越高。建议设置不同剂量和时间点如0、2、4、8、16、24小时，以检测佳的观察点。
3、所测样本的值高于标准曲线上限时，可用试剂二稀释样本后重新测定。
4、盖紧96孔板盖子并用封口膜密封。37ºC孵育，肉眼可见颜色变黄时的OD405值约为0.2，此时即可测定。颜色变化不明显可延长反应或过夜，但酶活性较强时，孵育时间过长将导致反应失去线性关系。
