英文名称 ：Caspase-9Activity Assay Kit
储存条件 ：-20℃
产品包装 ：盒装
检测方法 ：比色法
有 效 期 ：6个月
产品规格 ：20T 、50T 、100T
产品组成：
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试剂名称/规格
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20T
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50T
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100T
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保存条件
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试剂一
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液体20mL×1瓶
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液体20mL×1瓶
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液体25mL×1瓶
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-20℃保存
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试剂二
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液体30mL×1瓶
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液体60mL×1瓶
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液体120mL×1瓶
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-20℃保存
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试剂三
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液体0.25L×1支
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液体0.55mL×1支
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液体0.55mL×2支
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-20℃保存
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标准品
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液体1mL×1支
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液体1mL×1支
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液体1mL×1支
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-20℃保存
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产品说明：
Caspase是参与细胞凋亡过程的蛋白酶家族，包含10多个成员。Caspase-9也称ICE-LAP6或Mch6，可与细胞色素c和Apaf1形成复合物被激活，并进一步激活细胞凋亡的关键酶caspase-3，从而触发凋亡级联反应。Caspase-9是凋亡信号转导过程中重要的上游caspase，其激活可以通过磷酸化进行调控。
本试剂盒测定原理基于Caspase-9特异水解多肽底物LEHD-pNA(Leu-Glu-His-Asp-p-nitroanilide)，释放的游离硝基苯胺pNA在405nm有大吸收峰。采用可见光光度比色法测定pNA而得到Caspase活性。适用于检测哺乳动物组织、细胞Caspase-9活性。
注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计/酶标仪、100μL玻璃比色皿/96孔板、台式离心机、水浴锅/恒温培养箱、可调式移液器、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。
注意事项：
1、由于试剂二中含有还原剂（DTT），建议将样品用水稀释2倍后，用Bradford法测定蛋白浓度，以降低DTT对蛋白浓度测定的干扰。不建议使用BCA法测定蛋白浓度。
2、Caspase活性测定值低常见的原因是细胞未发生凋亡或细胞量太少，其次是观测时间不恰当。诱导凋亡时，并非剂量越大时间越长Caspase活性就越高。建议设置不同剂量和时间点如0、2、4、8、16、24小时，以检测佳的观察点。
3、所测样本的值高于标准曲线上限时，可用试剂二稀释样本后重新测定。
4、盖紧96孔板盖子并用封口膜密封。37ºC孵育，肉眼可见颜色变黄时的OD405值约为0.2，此时即可测定。颜色变化不明显可延长反应或过夜，但酶活性较强时，孵育时间过长将导致反应失去线性关系。
