英文名称 : α-Mannosidase(α-man)Activity Assay kit
产品包装 : 盒装
产品规格 : 100T/48S
储存条件 : -20℃
检测方法 : 微量法
有 效 期 : 6个月
产品组成:
试剂名称
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规格
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保存条件
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提取液一
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液体110mL×1瓶
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2-8℃保存
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试剂一
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液体15mL×1瓶
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2-8℃保存
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试剂二
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粉剂×2支
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-20℃保存
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试剂三
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粉剂8mL×1瓶
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-20℃保存
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试剂四
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液体1.5mL×1瓶
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2-8℃保存
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标准品
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液体1mL×1支
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-20℃保存
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产品说明:
α-man 分布广泛、种类繁多,在真核生物胞质、内质网、高尔基体、溶酶体中都有发现,不同种类、功能的 α-man 共同参与 N-聚糖的修饰过程。α-man 和特定底物发生反应,其生成物在 405nm 处有特征吸收峰,根据吸光度的变化率可计算出 α-man 活性。
注意:实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者 增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品:
紫外分光光度计/酶标仪、低温离心机、恒温培养箱/水浴锅、匀浆器/研钵、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96 孔板、冰和蒸馏水。
注意事项:
如果测定吸光值 A>1.5 或 ΔA>1,建议稀释样本后再测定,计算公式中乘以稀释倍数;如果测定吸光值 较低或接近空白 OD 值,建议增加样本量后再进行测定。
实验实例:
1 、称取 0.1 g 兔子肝脏组织,加入 1 mL 提取液, 冰浴匀浆, 12000 g ,4℃条件下离心 10 min;取上清置于冰上 待测。使用 96 孔板按照测定步骤操作,计算 ΔA=A 测定管-A 对照管=0.404-0.309=0.095,标准曲线 y=1.3642x+ 0.0037,计算 x=0.0669 ,按公式计算活性:
α-甘露糖苷酶酶活(U/g 质量) = x×0.1÷W×F = 0.0669 U/g质量
2 、称取 0.1 g 绿萝叶片,加入 1 mL 提取液, 冰浴匀浆,12000 g ,4℃条件下离心 10 min;取上清置于冰上待测。 使用 96 孔板按照测定步骤操作,计算 ΔA=A 测定管-A 对照管=0.179-0.159=0.02,标准曲线 y=1.3642x+ 0.0037, 计算 x=0.0119 ,按公式计算活性:
α-甘露糖苷酶酶活(U/g 质量)= x×0.1÷W×F = 0.0119 U/g质量
3 、 用 0.025mL牛血清按操作步骤进行实验,使用96孔板按照测定步骤操作,计算 ΔA=A 测定管-A 对照管=0.107- 0.086=0.021 ,标准曲线 y=1.3642x+ 0.0037,计算 x=0.0127 ,按公式计算活性:
α-甘露糖苷酶酶活(U/g 质量)= x×0.1÷W×F = 0.0127 U/mL