英文名称 : Glutathione Reductase Activation Coefficient Assay Kit
产品包装 : 盒装
产品规格 : 100T/48S
储存条件 : -20℃
检测方法 : 微量法
有 效 期 : 6个月
产品组成 :
试剂名称
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规格
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保存条件
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试剂一
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液体65mL×1瓶
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2-8℃保存
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试剂二
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粉剂×1支
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2-8℃保存
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试剂三 A
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粉剂×1支
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-20℃保存
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试剂三 B
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液体1mL×1支
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2-8℃保存
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试剂四
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液体1.2mL×1支
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2-8℃保存
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试剂五
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粉剂×1支
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-20℃保存
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试剂六
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液体20 mL×1瓶
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2-8℃保存
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试剂七
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液体25 mL×1瓶
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2-8℃保存
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产品说明:
谷胱甘肽还原酶(GlutathioneReductase,GR)是广泛存在于真核与原核生物中的一种黄素蛋白氧化还原酶,该酶以核黄素衍生物核黄素腺嘌呤二核苷酸(FAD)为辅基,催化NADPH还原氧化型谷胱甘肽(GSSG)生成还原型谷胱甘肽(GSH),维持巯基和膜蛋白处于还原状态。当生物体内缺乏核黄素时,FAD含量相应减少,GR活性也随之降低,谷胱甘肽还原酶活性系数(GRActivationCoefficient,GRAC)迅速升高,出现唇炎、口角炎、结膜炎等临床症状。因此,GRAC用于核黄素营养状况评价,对于早期发现缺乏病患者采取防治措施具有重要意义。
GR催化NADPH还原GSSG,生成GSH,GSH与5,5’-二硫代-双-(2-硝基苯甲酸)(5,5’-dithiobis-2-nitrobenoicacid,DTNB)反应产生2-硝基-5-巯基苯甲酸,2-硝基-5-巯基苯甲酸在波长412nm处有特征吸收峰,通过412nm处吸光度的变化可计算GR的活性。根据加入FAD前后GR活性的变化可计算得到GRAC。
注意:实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品:
可见分光光度计/酶标仪、低温离心机、分析天平、水浴锅/恒温培养箱、微量玻璃比色皿/96孔板、可调式移液枪、研钵/匀浆器/细胞超声破碎仪、冰和蒸馏水。
注意事项:
1.建议准备核黄素水平正常的样本进行检测,方便与核黄素缺乏的样本进行比较;如果没有核黄素水平正常的样本,可参考一般核黄素水平正常的样本GRAC为0.9-1.2;
2.如果样本测定管吸光值大于1.5,建议将样本用试剂一稀释后进行测定;如果样本测定管吸光值接近空白管,可适当增大样本质量重新提取或提高加样表中样本体积,对照管、空白管蒸馏水需进行相应调整。
3.样本蛋白浓度需自行测定。由于提取液中含有一定浓度的蛋白(约0.11mg/mL),所以在测定样本蛋白浓度时需要减去提取液本身的蛋白含量。
实验实例 :
1.取0.1051g大鼠肾脏样本,加入1mL试剂一进行冰浴匀浆,离心后取上清,按照测定步骤操作,用96孔板测得:A测定=0.370,A对照=0.360,A空白=0.107,计算得:
GRAC=(A测定-A空白)÷(A对照-A空白)=1.040。
2.取10μL人红细胞,加入990μL试剂一,充分溶血混匀,离心后取上清,按照测定步骤操作,用96孔板测得:A测定=0.479,A对照=0.461,A空白=0.107,计算得:
GRAC=(A测定-A空白)÷(A对照-A空白)=1.051。
3. 取马血清样本,直接按照测定步骤操作,用96孔板测得:A测定=0.397,A对照=0.392,A空白=0.107,计算得:GRAC=(A测定-A空白)÷(A对照-A空白)=1.018。