英文名称 : ATP Content Assay Kit(WST-1 Method)
产品包装 : 盒装
产品规格 : 50T/48S
储存条件 : -20℃
检测方法 : 可见分光光度法
有 效 期 : 6个月
产品组成:
试剂名称
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规格
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保存条件
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提取液
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液体 60 mL×1 瓶
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2-8℃保存
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试剂一
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液体 45 mL×1 瓶
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2-8℃保存
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试剂二
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粉剂×1 瓶
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2-8℃保存
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试剂三
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液体 8 mL×1 瓶
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2-8℃保存
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试剂四
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粉剂×3 支
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-20℃保存
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试剂五
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粉剂×1 瓶
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2-8℃保存
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试剂六
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粉剂×3 支
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-20℃保存
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试剂七
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液体 12 mL×1 瓶
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2-8℃保存
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标准品
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粉剂×1 支
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-20℃保存
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产品说明:
ATP 广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,是生物能量通货,能荷是描述细胞能量代谢状态的主要参数。测定ATP含量并且计算能荷,能够反映能量代谢状态。
HK 催化葡萄糖和 ATP合成6-磷酸葡萄糖,6-磷酸葡萄糖脱氢酶进一步催化 6-磷酸葡萄糖脱氢生成NADPH, WST- 1可与NADPH 反应,产生水溶性formazan,在450nm下有特征吸收峰。
注意:实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品:
可见分光光度计、水浴锅/恒温培养箱、低温离心机、可调式移液枪、1mL 玻璃比色皿、研钵/匀浆器/超声波 细胞破碎仪、蒸馏水、冰和氯仿。
注意事项:
1 、加入提取液离心后的上清若为浑浊为正常现象。
2 、如果 ΔA 测定>1.5,建议将样本用蒸馏水稀释后进行测定。注意计算公式中乘以稀释倍数;如果吸光值过低 或接近空白,建议统一放置于 37℃水浴锅/恒温培养箱中培养2h或更长时间后再次测定, 也可以加大样本量后进行测定,注意同步修改计算公式。
3 、提取液中含蛋白变性成分,若按蛋白浓度计算需要另取样本重新计算。
实验实例:
1 、取0.108g小鼠脑加入1mL提取液进行冰浴匀浆,10000g 4℃离心10min,取上清至另一EP 管中,加入500μL的氯仿充分震荡混匀,10000g 4℃离心3min,取上清,置冰上按照测定步骤操作,使用1mL玻璃比色皿测得计算ΔA测定=0.283-0.154=0.129 ,ΔA标准=A标准-A空白=0.569-0.154=0.415,按样本质量计算含量得:ATP含量(μmol/g质量)=0.3125×ΔA测定÷ΔA 标准÷W=0.899μmol/g 质量。
2 、取 0.111g绿萝叶片加入1mL提取液进行冰浴匀浆,10000g 4℃离心10min,取上清至另一EP管中,加入500μL的氯仿充分震荡混匀,10000g 4℃离心3min,取上清,置冰上按照测定步骤操作,使用1mL玻璃比色皿测得计算ΔA测定=0.387-0.154=0.233 ,ΔA标准=A标准-A 空白=0.569-0.154=0.415,按样本质量计算含量得:ATP含量(μmol/g 质量)=0.3125×ΔA测定÷ΔA 标准÷W=1.58μmol/g质量。