英文名称 :Caspase-1 Activity Assay Kit
产品别名 :Caspase1活性测定试剂盒
产品包装 :盒装
产品规格 :20T 、50T 、100T
储存条件 :-20℃
检测方法 :比色法
有 效 期 :6个月
产品组成:
试剂名称/规格
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20T
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50T
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100T
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保存条件
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试剂一
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液体20mL×1瓶
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液体20mL×1瓶
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液体25mL×1瓶
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-20℃保存
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试剂二
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液体30mL×1瓶
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液体60mL×1瓶
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液体120mL×1瓶
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-20℃保存
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试剂三
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液体0.25L×1支
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液体0.55mL×1支
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液体0.55mL×2支
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-20℃保存
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标准品
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液体1mL×1支
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液体1mL×1支
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液体1mL×1支
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-20℃保存
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产品说明:
Caspase是参与细胞凋亡过程的蛋白酶家族,包含10多个成员。Caspase-1是唯一可剪切IL-1b和IL-18前体产生活性细胞因子的caspase。Caspase-1通过剪切Bcl-XL调节细胞凋亡,并通过对细胞因子前体的剪切来调控相关细胞因子介导的免疫炎性反应。
基于Caspase-1特异水解多肽底物Tyr-Val-Ala-Asp-p-nitroanilide(YVAD-pNA),释放的游离硝基苯胺pNA在405nm有大吸收峰。采用可见光光度比色法测定pNA而得到Caspase活性。适用于检测哺乳动物组织、细胞Caspase-1活性。
注意:实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品:
可见分光光度计/酶标仪、100μL玻璃比色皿/96孔板、台式离心机、水浴锅/恒温培养箱、可调式移液器、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。
注意事项:
1、由于试剂二一中含有还原剂(DTT),建议将样品用水稀释2倍后,用Bradford法测定蛋白浓度,以降低DTT对蛋白浓度测定的干扰。不建议使用BCA法测定蛋白浓度。
2、Caspase活性测定值低常见的原因是细胞未发生凋亡或细胞量太少,其次是观测时间不恰当。诱导凋亡时,并非剂量越大时间越长Caspase活性就越高。建议设置不同剂量和时间点如0、2、4、8、16、24小时,以检测佳的观察点。
3、所测样本的值高于标准曲线上限时,可用试剂二稀释样本后重新测定。
4、盖紧96孔板盖子并用封口膜密封。37ºC孵育,肉眼可见颜色变黄时的OD405值约为0.2,此时即可测定。颜色变化不明显可延长反应或过夜,但酶活性较强时,孵育时间过长将导致反应失去线性关系。