纪宁生物帮您整理ELISA实验操作要点样本的技巧

纪宁生物帮您收集整理三类样本的技巧: 由于ELISA实验只能检测可溶性蛋白质的含量，因此要求样本应清晰透明并离心除去沉淀物或悬浮物质。为确保实验的准确性， -20℃或-80℃保存的样本应在1-6个月内完成检测，4℃保存的样本在一周内完成检测。此外，样本中不能含有会抑制HRP活性的NaN3，否则会造成假阴性结果。可用于ELISA实验的样本一般有血清、血浆、尿液、细胞培养上清以及组织匀浆等。不同样本类型的预处理方法也不同。适当的样本预处理是确保ELISA实验正确性和准确性的第一步。这里，我们将介绍几种不同样本类型的处理方法。

血清

血清是ELISA实验最常用的样本，其预处理也十分简单。使用无热原无内毒素的试管或离心管采集血液样本，将试管或离心管在室内温度下放置自然凝固（视室温环境10分钟到2小时不等）或4℃过夜，分离出血清，（建议倾斜试管或离心管以扩大液面的横截面，使血清能更大程度的分离出来，），2-8℃条件离心5分钟左右（5000-6000转/分钟），仔细收集上清，立即进行测定，建议在-20℃或-80℃下将收集的血清分装保存，避免反复冻融，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。

注意事项：

在收集血液样本的过程中应避免溶血，因为红细胞在溶解时会释放具有过氧化物酶活性的物质，这种情况下，ELISA实验中将会出现非特异性显色反应，导致检测结果不准确，出现假阳性结果。另外，样本还应避免细菌污染，因为细菌可能含有内源性HRP，也会导致检测结果不准确。

血浆

应根据标本的要求选择EDTA、肝素钠、枸橼酸纳或柠檬酸钠作为抗凝剂，使用含抗凝剂的采血管或离心管采集血液样本，采集后30分钟内，混合10-20分钟后，2-8℃条件离心5分钟左右（5000-6000转/分钟），仔细收集上清液（血浆），建议在-20℃或-80℃下将收集的血清分装保存，避免反复冻融。样本应避免溶血或高血脂。保存过程中如有沉淀形成，使用前应该再次离心。

注意事项：

检测前请仔细阅读ELISA试剂盒说明书，查看该试剂盒针对抗凝剂是否有特殊要求。

尿液

用无菌管收集，2-8℃条件离心5分钟左右（5000-6000转/分钟）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

细胞培养上清

检测分泌性的成份时，用无菌管收集。将细胞培养上清液吸入离心管中并以2-8℃条件离心5分钟左右（5000-6000转/分钟），除去细胞碎片和杂质，收集上清液备用，样本保存在-20℃或-80℃，避免反复冻融，保存过程中如有沉淀形成，使用前应再次离心。

脑脊液

用无菌管收集，2-8℃条件离心5分钟左右（5000-6000转/分钟），仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，使用前应再次离心。（采集大鼠脑脊液）的方法：采集脑脊液时，用湿纱布擦试大鼠颈背部皮肤，剪去背毛暴露皮肤。两耳连线剪一横切口(1. 5cm左右)，在其中点向尾侧沿皮下剪开2cm，将皮分离两侧，扩大视野。紧贴大鼠头骨依次逐层剪切各肌层，并断端依次拉向尾侧扩大视野。注意，有出血时用干纱布按压止血，保持术口清晰。接近颈后黄韧带时，小心地用7号注射针头分离覆盖的肌肉，暴露寰枕膜。用1ml注射器(针头用止血钳使针尖与针体成150度钝角)，针斜面向上，针尖端近水平刺入蛛网膜下腔，固定针体，缓慢抽取脑脊液，一般采集量为100-200微升。)

唾液

用无菌管收集，2-8℃条件离心5分钟左右（5000-6000转/分钟），仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，使用前应再次离心。