大鼠睾酮(T)ELISA试剂盒的应用

大鼠睾酮(T)ELISA试剂盒的应用
大鼠睾酮(T)ELISA试剂盒用于体外定量检测血清、血浆、组织匀浆及相关液体样本中睾酮(T)的含量。

实验原理:
试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被睾酮(T)捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并*洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成终的。颜色的深浅和样品中的睾酮(T)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。
样本处理及要求
1、血清：全血标本请于室温放置2小时或4℃过夜后于1000g离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
2、血浆：可用EDTA或肝素作为抗凝剂，标本采集后30分钟内于2-8°C 1000g离心20分钟，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
3、细胞培养物上清或其它生物标本：1000g离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
操作步骤：
1、从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。
2、设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；
3、样本孔中加入待测样本50μL；空白孔不加。
4、除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。
5、弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液（350μL），静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。
6、每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。
7、每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。
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