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纪宁生物亮氨酸氨基肽酶(LAP)测试盒(分光光度法/48样)

纪宁生物亮氨酸氨基肽酶(LAP)测试盒(分光光度法/48样)样本的前处理:

亮氨酸氨基肽酶(LAP)测试盒(分光光度法/48样)

注意:正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定

测定意义:

LAP是一类能水解肽链N-末端为亮氨酸的酶,广泛存在于肝、肾、胰等组织中,尤其以肝脏中含量最为丰

富。各类肝病患者因肝细胞损伤,血清LAP的活性均有不同程度的升高,因此,血清LAP活性的检测能

从不同侧面反映各种肝病的发生和发展。

测定原理:

LAP分解L-亮氨酰对硝基苯胺生成对硝基苯胺,后者在405nm有最大吸收峰,通过测定吸光值升高速率来

计算LAP活性。

自备用品:

可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。

试剂的组成和配制:

提取液:液体50mL×1瓶,4℃保存;

试剂一:液体40mL×1瓶,4℃保存;

试剂二:粉剂×1瓶,-20℃保存;

样本的前处理:

1、细菌、细胞或组织样品的制备:

细菌或培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(104个):提

取液体积(mL)为1000~5000:1的比例(建议2000万细菌或细胞加入1mL提取液),超声波破碎细菌或

细胞(冰浴,功率20%或200W,超声3s,间隔10s,重复30次);8000g4℃离心10min,取上清,置冰

上待测。

组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL提

取液),进行冰浴匀浆。8000g4℃离心10min,取上清,置冰上待测。

2、血清(浆)样品:直接检测。

LAP测定步骤:

1、分光光度计预热30min以上,调节波长至405nm,蒸馏水调零。

2、将试剂二转移至试剂一中充分溶解(如较难溶解,可50℃水浴加热约30min促进溶解);在37℃(哺

乳动物)或25℃(其它物种)水浴10min以上;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融。

3、在微量石英比色皿或96孔板中加入250μL样本和750μL试剂一,混匀后立即记录405nm处初始吸光

值A1和2min后的吸光值A2,计算ΔA=A2-A1。

注意事项:若ΔA大于0.5,需将酶液用提取液稀释,计算公式中乘以相应稀释倍数。使A2-A1小于0.5,

可提高检测灵敏度。

LAP活力单位的计算:

1、血清(浆)LAP活力的计算:

单位的定义:每mL血清(浆)每分钟生成1nmol的对硝基苯胺定义为一个酶活力单位。

LAP(nmol/min/mL)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×10⁹

]÷V样÷T=205.8×ΔA

2、组织、细菌或细胞中LAP活力的计算:

(1)按样本蛋白浓度计算:

单位的定义:每mg组织蛋白每分钟生成1nmol对硝基苯胺定义为一个酶活力单位。

LAP(nmol/min/mgprot)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×10⁹

]÷(V样×Cpr)÷T=205.8×ΔA÷Cpr

(2)按样本鲜重计算:

单位的定义:每g组织每分钟生成1nmol对硝基苯胺定义为一个酶活力单位。

LAP(nmol/min/g鲜重)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×10⁹

]÷(W×V样÷V样总)÷T=205.8×ΔA÷W

(3)按细菌或细胞密度计算:

单位的定义:每1万个细菌或细胞每分钟生成1nmol对硝基苯胺定义为一个酶活力单位。

LAP(nmol/min/10⁴cell)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×10⁹

]÷(2000×V样÷V样总)÷T=0.103×ΔA

V反总:反应体系总体积,1×10-3L;ε:对硝基苯胺摩尔消光系数,9.72×103L/mol/cm;d:比色皿光径,

1cm;V样:加入样本体积,0.25mL;V样总:加入提取液体积,1mL;T:反应时间,2min;Cpr:样本

蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g;2000:细菌或细胞总数,2000万。

上海纪宁生物科技有限公司自成立以来,一向以“优异亮氨酸氨基肽酶(LAP)测试盒(分光光度法/48样)的产品,优惠的报价和交心的服务”得到广阔新老客户的必定和支撑,不断提高自身的专业技术水平和服务质量,为您提供非常好的产品。

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